Aplicações da pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania (V. ) braziliensis, por citometria de fluxo, em estudos clínicos da Leishmaniose cutânea localizada / Applications of the research of a flow cytometry to detected anti-live Leishmania (V. ) braziliensis promastigotes IgG antibodies (FC-ALPA-IgG) in clinical studies of the localized cutaneous leishmaniasis

RESUMO

Este estudo se refere ao desenvolvimento de uma nova metodologia,fundamentada na pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania(V.) braziliensis,por citometria de fluxo-AAPV-IgG para diagnóstico e monitoramento de cura da leishmaniose cutânea localizada-LCL.Em uma primeira etapa de padronização do método,ficou estabelecida a nova metodologia que permite discriminar a reatividade de IgG do soro de pacientes portadores de LCL(L+)daquela observada para indivíduos sem manifestação clínica de LCL(L-),empregando-se em cada testea)500.000 promastigotas vivas de 10 dias de cultivo in vitro;b)soro teste na diluição 11.024;c)anticorpo secundário anti-IgG humano-FITC na diluição 1400;d)ambas incubações a 37ºC por 30 minutos e)o valor do percentual de parasito fluorescentes positivos-PPFP de 60por cento como ponto de corte entre resultados positivos e negativos.Uma segunda etapa,foi feita a avaliação comparativa do desempenho do método proposto e de um método tradicional,a Reação de Imunofluorescência Indireta-RIFI.A análise dos índices de desempenho...Posteriormente...desempenho da pesquisa AAPV-IgG aplicada ao diagnóstico da LCL,uma vez que podem apresentar resultados falso-negativos e falso-positivos,respectivamente.Considerando a queda no desempenho da AAPV-IgG na identificação de LCL numa amostragem populacional que inclui LV e DC,foi proposta a avaliação do desempenho da quantificação das subclasses de IgG no esclarecimento de situações positivas no teste original.A análise combinada da AAPV-IgG1/IgG2 mostrou-se útil no esclarecimento de situações positivas no teste original, quando aplicado numa amostragem populacional que inclui LV e DC.O estabelecimento do ponto de corte de 60por cento de PPFP para AAPV-IgG1 e de 50por cento de PPFP para AAPV-IgG2 permitiu o esclarecimento de 93por cento das situações AAPV-IgG positivas que não apresentavam LCL e confirmar 100por cento dos casos de LCL em atividade clínica.A análise das RVs demonstrou que um resultado positivo na análise combinada praticamente confirma a presença de LCL e que um resultado negativo praticamente confirma a ausência de LCL.Finalmente,foi demonstrada a utilidade da AAPV-IgG no monitoramento precoce e tardio da cura pós-terapêutica específica da LCL.Observou-se que,71por cento dos pacientes sem recidivas após 2 anos do tratamento foram identificados precocemente(30d-PT), com queda na reatividade de PPFP,superior a 10por cento, na diluição do soro 14.096.