Análise quantitativa de círculos excisados pelo rearranjo dos genes do receptor de linfócitos T (TREC) no lúpus eritematoso sistêmico / Quantitative analysis of T-cell receptor gene excision circles(TREC) in systemic lupus erythematosus

RESUMO

Introdução: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença auto-imune que se caracteriza por uma série de alterações nos linfócitos T. O timo é o principal órgão responsável pelo desenvolvimento e maturação das células T. Recentemente um novo método foi descrito para quantificação da função tímica em sangue periférico. Trata-se da amplificação por PCR do TREC (círculos excisados pelo rearranjo do TCR), um marcador de emigrantes tímicos recentes, gerado durante o processo de rearranjo gênico dos receptores de células T no timo. A análise dos níveis de TREC em linfócitos periféricos poderá contribuir para o entendimento do papel do timo e dos linfócitos recém egressos do timo nas alterações imunológicas encontradas no LES. Objetivos: Quantificação dos níveis de TREC em células linfomononucleares do sangue periférico de indivíduos com LES em atividade e comparação com indivíduos normais pareados conforme sexo e idade. Materiais e métodos: Foram avaliados 32 pacientes com diagnóstico de LES há menos de 3 anos (critérios do Colégio Americano de Reumatologia-ACR) e 32 indivíduos sadios pareados para sexo e idade. A média de idade dos pacientes com LES foi de 26,7 anos (18 a 47 anos) e dos controles normais de 27,2 anos (18 a 50 anos). Após consentimento informado, todos os pacientes foram avaliados segundo um protocolo clínico padrão, compreendendo os domínios do SLEDAI. As dosagens de anticorpos anti-DNA e complemento sérico foram feitas por imunofluorescência indireta em Crithidia luciliae e imunohemólise radial, respectivamente. A quantificação dos níveis de sjTREC de DNA genômico em células linfomononucleares de sangue periférico foi feita pelo método de PCR quantitativo em tempo real (Real time PCR). Uma curva padrão foi construída para quantificação absoluta dos valores do produto amplificado para cada amostra. Para a construção da curva padrão foi utilizado um fragmento de 376bp da seqüência do sjTREC clonado no plasmídeo pCR II-TOPO. A concentração de TREC foi expressa em número de cópias de TREC por g de DNA. Resultados: A média do SLEDAI nos 32 pacientes avaliados foi de 14,6, variando de 6 a 28. A manifestação clínica mais freqüente foi acometimento renal, encontrada em 23 dos 32 pacientes (71,9 por cento), seguida por lesões cutâneas, encontradas em 10 (31,3 por cento) pacientes...(au)