Identificação e caracterização de genes diferencialmente expressos em hifas de Candida albicans / Identification and characterization of genes differentially expressed in hypha of Candida albicans

RESUMO

A transição morfológica de levedura para hifa é essencial para a virulência de Candida albicans. Esta transição envolve a expressão de genes hifa-específicos que estão sob o controle de fatores transcricionais. Para descobrir genes hifa-específicos utilizamos um método de triagem diferencial, onde clones de biblioteca de DNA genômico foram hibridizados com sondas de cDNA de levedura e hifa. Dois clones com aumento de expressão em hifa foram selecionados. O sequenciamento dos insertos destes clones permitiu a identificação de dois genes metabólicos importantes CaHXT7 (high-affinity hexose transporter) e CaYLL34 (da família AAA ATPase). As regiões codificadoras completas destes genes foram caracterizadas e a análise das proteínas hipotéticas revelou que (1) CaHxt7p tem um domínio de transportador de hexose e (2) CaYll34p tem dois domínios AAA ATPase, com possível papel na fusão de membranas e degradação de proteínas (por exemplo, a valosina humana). Este é o primeiro estudo que demonstra aumento de expressão de genes metabólicos em hifas de C. albicans. CaYLL34 foi inativado por mutagênese insercional, utilizando o cassete HisG-URA3HisG, gerando o mutante M61. Esta linhagem apresentou alterações morfológicas acentuadas como aumento de vacúolo, de tamanho celular e diminuição na taxa de indução de hifa em todas as condições analisadas. Estes resultados mostram que a diminuição parcial dos níveis de CaYll34p celular é suficiente para afetar a morfologia celular característica, porque somente um alelo foi inativado, enquanto o outro continua funcional. Ainda, a associação dos produtos de CaHXT7 e CaYLL34 com a formação de hifas torna estas proteínas potenciais alvos para desenvolvimento de novas drogas antifúngicas