Diseño y estandarización de una prueba de PCR para la detección específica de Trypanosoma cruzi / PCR design and standardization for Trypanosoma cruzi specific detection

RESUMEN

Objetivo: Tripanosoma cruzi, agente causal de la enfermedad de Chagas, presenta dos tipos de unidades H2A1,2 y 0,76 Kb. Dada la ausencia de la unidad de 1,2 KB en T. rangeli, en este trabajo se desarrolló una prueba de PCR para la detección de T. cruzi, usando como blanco este gen. Materiales y métodos: los oligonucleótidos TcH2AF y TcH2AR fueron diseñados usando el programa Oligo TM versión 4.0 for Macintosh. La reacción de PCR (Tris-HCI 10 mM pH 9, KCl 50 mM, triton x-100 0,1 por ciento dNTPs 200 mM, cebadores 20 pmoles, MgCl2 1,5 mM, Taq DNA polimerasa 1,25 U y ADN 125 ng) fue sometida al siguiente programa en un termociclador PTC-100 MJ-Research denaturación 95°C por 5 min, 15 ciclos con denaturación a 95°C por 30 s, anillaje y extensión a 72°C por 1 min y 20 ciclos con anillaje a 65°C durante 30 s y extensión a 72°C por 30 s. los productos amplificados fueron visualizados en geles de agarosa al 1,5 por ciento, teñidos con bromuro de etidio. Resultados: TcH2AF/R amplifican una banda de 230 pb en cepas pertenecientes a los Zimodemas I, II y III de T.cruzi, con una sensibilidad de 1fg aun en la presencia de ADN heterólogo; mientras que no amplifican el ADN de cepas de T. rangeli tanto KP1(+) como KP(-). Conclusiones: esta PCR constituye una herramienta potencial para la detección de T. cruzi en muestras biológicas de vector, humano y/o ratón