"Fagocitose e morte intracelular de Streptococcus pneumoniae opsonizado por soros de indivíduos com diferentes níveis de anticorpos sorotipo específicos" / Phagocitosis and intracellular killing of S. pneumonae opsonized with serum of individuals with different levels of sorotype specific antibodies

RESUMO

O presente trabalho avaliou a opsonofagocitose e a morte de Streptococcus pneumoniae dos sorotipos 14, 1 e 6B por neutrófilos humanos através de duas metodologias de fluorescência que empregam, a saber, citometria de fluxo e análise microscópica, utilizando como opsoninas, soros de indivíduos imunizados com a vacina polissacarídica capsular 23-valente. Os parâmetros de opsonofagocitose foram comparados com os índices de morte bacteriana intracelular e com os níveis de anticorpos sorotipo-específicos quantificados por ELISA (“enzyme linked immunosorbent assay”). Foram utilizadas bactérias viáveis e coloração com o fluorocromo “acridine orange” (AO) para leitura microscópica ou bactérias inativadas pelo calor, marcadas com isotiocianato de fluoresceína (FITC), para citometria de fluxo. As amostras de soro foram obtidas de voluntários adultos sadios (26 - 54 anos) e de crianças (5 - 12 anos), colhidas antes e um mês após a imunização. A ativação do sistema complemento nas amostras de soro contribuiu para aumentar significativamente a ingestão e morte bacteriana intracelular em ambos os ensaios para os três sorotipos de pneumococos estudados. Os índices de morte bacteriana registrados pela observação microscópica de células coradas com AO correlacionaram-se com os parâmetros de opsonofagocitose obtidos pela citometria de fluxo (r= 0,80). A avaliação da ingestão de pneumococos por citometria de fluxo, pode traduzir, por conseguinte, o grau de destruição bacteriana pelos neutrófilos, tornando vantajoso o uso do método, já que permite analisar grande número de amostras no mesmo ensaio. Comparando-se as avaliações quantitativa e funcional dos anticorpos sorotipo-específicos, foram observados os seguintes resultados: - correlação direta entre valores calculados de parâmetros de opsonofagocitose com concentrações dos anticorpos específicos determinadas por ELISA (r= 0,72) no grupo de amostras séricas com no mínimo 5,2 µg/ml das referidas imunoglobulinas; - aumento significante da capacidade de opsonização do grupo de amostras que apresentou aumento dos níveis de anticorpos após imunização, em comparação com amostras pré-vacinais.Os resultados deste estudo apontam para a importância da avaliação funcional de soros de indivíduos imunizados contra Streptococcus pneumoniae, quando os níveis de anticorpos sorotipo específicos estejam abaixo de 5,2 µg/ml