Estudo da regulação da expressão do gene da carboxipeptidase M de camundongo / Expression regulation studies of the carboxypeptidase M gene in mouse

RESUMO

A caracterização da estrutura molecular da carboxipeptidase M humana originou os estudos da enzima em camundongos. Utilizando análise computacional a estrutura do gene em camundongos foi determinada comparando a seqüência de humanos no banco de dados genômico de camundongos. As duas seqüências apresentaram 82 por cento de similaridade entre elas. Foram determinados todos os fatores envolvidos na caracterização do RNAm como tamanho de exons e introns, região de catálise, região hidrofóbica, peptídeo sinal, sítios de glicosilação e glutâmicos catalíticos. A análise computacional proporcionou também a observação de um EST o qual também se tomou objeto de estudos. Após serem definidos todos os fatores pertencentes ao gene iniciamos os experimentos com a demonstração da atividade luciferase para os promotores da CPM e do EST. A análise foi feita em três diferentes tipos celulares para evidenciar a existência de atividade promotora e sua diferente regulação nessas linhagens. O EST foi clonado e transfectado em células para dosagem fluorimetrica de sua atividade carboxipeptidase básica. A técnica de PCR em tempo real foi utilizada para obtenção dos resultados de expressão gênica relativa tanto da carboxipeptidase M como do EST em camundongos nas fases embrionária, neonatal e adulta. Com base nos dados obtidos pudemos concluir a estrutura da carboxipeptidase M e do EST encontrado, sua regulação transcricional e padrão de expressão nos diversos RNAs extraídos de tecidos de camundongos.