Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) para detecção dos genes gag e pol do Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) / Polymerase Chain Reaction (PCR) for detection of the genes gag and pol of the Immunodeficiency Virus, Feline (FIV)

RESUMO

O presente estudo teve como objetivo principal padronizar a técnica de reação em cadeia de polimerase(PCR)para detecção do genoma proviral do vírus da imunodeficiência felina(FIV),um retrovirus associado com a síndrome da imunodeficiência adquirida(AIDS)dos felinos.Avaliamos amostras de sangue de 97 felinos domésticos provenientes da cidade do Rio de Janeiro.Deste total,60 felinos eram sororeativos para anti-FIV e 37 felinos soronegativos, que foram avaliados como grupo controle.O status imunológico destes felinos...Entre as amostras sororeativas,40(67por cento)apresentavam alterações clínicas,sendo que 38 foram classificados na fase de complexo relacionado à AIDS(CRA)e 2 na fase AIDS. Para a extração de DNA utilizou-se QIAmp Blood Mini Kit (QIAGEN).Após a extração,as amostras foram submetidas a PCR para DNA mitocondrial do gene 16s como controle positivo de extração.Para a detecção do genoma proviral do FIV foram selecionados iniciadores que amplificam uma região com 483 pb do gene gag e 471 pb do gene pol.Para a nested PCR foram selecionados iniciadores que amplificam uma região interna com 203 pb do gene gag e 183 pb do gene pol.A especificidade dos iniciadores foi avaliada utilizando amostras de animais sororeativos para o vírus da leucemia felina(FeLV),um retrovirus heterólogo.Quatro protocolos distintos foram avaliados para a região gag e 3 para a região pol,buscando obter o melhor método para amplificação.Das amostras sororeativas,39(65por cento) apresentaram resultado de amplificação para a região gag utilizando os 4 protocolos,e 6(10por cento)para a região pol,utilizando 3 protocolos.Entre as amostras soronegativas,1 felino apresentou resultado de amplificação para a região gag.Em uma 2ªcoleta este felino demonstrou conversão sorológica.O seqüenciamento genômico permitiu avaliar a especificidade dos fragmentos amplificados em 8 amostras,entretanto não foram obtidos resultados conclusivos em relação aos subtipos virais.Os protocolos selecionados para...