The effect of the omission of perfusate orthophospahate on lactate gluconeogenesis and Pi exchange in the perfused fasted rat liver

RESUMEN

En la estandardización de un método para la perfusión del hígado de la rata. Hems et al., observaron que al omitir el fosfato del medio tenía lugar una reducción de la neoglucogénesis a partir de lactado, en un 50%. Con el propósito de utilizar esta técnica para producir deplección aguda de fosfato en el hígado, se realizaron experimentos similares con un perfusado que sólo difería por contener aproximadamente el doble de eritrocitos humanos (20-22%). Los glóbulos rojos humanos usados habían sido envejecidos 4-5 semanas en condiciones de banco de sangre. Hems y colaboradores encontraron que en estas condiciones los hematíes pierden su poder glicolítico y mantienen su capacidad para transportar oxígeno. Con el fin de acentuar la depleción de Pi, los hígados de las ratas previamente mantenidas en ayunas por 24 h. fueron perfundidos con medio sin fosfato por 75 min. y luego transferidos a otro aparato de perfusión también privado de Pi en el cual se mantuvo al órgano por 120 min. adicionales. A los 15 min. de haber montado el hígado para la segunda perfusión 1 micronCI de Pi de alta actividad por ml, se añadió al medio y a los 15 min. se tomó la muestra cero, de allí en adelante se obtuvieron muestras adicionales cada 15 min. La omisión de fosfato del medio no redujo la gluconeogenesis a partir del lactado ni aún añadiendo glucagon para estimular ese proceso. En los experimentos de perfusión del hígado y en los blancos en los cuales se hizo circular el perfusado en ausencia del hígado, se observó que el valor inicial de Pi era alrededor de 50% del obtenido con el medio standard, lo que indica que la liberación de fosfato por los hematíes y por el hígado no permitió trabajar con el medio libre del anión. La hemólisis fue mínima y las muestras fueron esfriadas rápidamente para evitar desintegración de compuestos fosforados. Se observó también que los glóbulos rojos humanos envejecidos por 4-5 semanas no pierden su poder glicolítico. En la depleción parcial del fosfato obtenida en nuestros experimentos, el lactado y con mayor intensidad el lactado...