Estudo do efeito anti-apoptótico do Mycobacterium leprae em células de Schwann humanas / Study of the anti-apoptotic effect of the Mycobacterium leprae in human Schwann cells

RESUMO

A Hanseníase, causada pelo Mycobacterium leprae, apresenta como sintoma clínico mais relevante lesões no sistema nervoso periférico. As estratégias utilizadas pelo M. leprae para infectar e se multiplicar nas células de Schwann (CS) são,contudo,pouco conhecidas. Neste trabalho investigamos o efeito anti-apoptótico do M. leprae sobre a célula hospedeira,à semelhança do observado na literatura com outros patógenos intracelulares obrigatórios. Para tal, CS humanas da linhagem ST88-14 foram tratadas ou não com a bactéria e incubadas em meio RPMI sem soro para induzir a apoptose. A viabilidade celular foi avaliada por 3 métodos: i) redução enzimática de Metiltetrazólio (MTT), ii)capacidade celular de excluisão do corante Azul de Tripan e iii) coloração vital com diacetato de fluoresceína e brometo de etídio. Após 24-48h de incubação, as células tratadas com M.leprae apresentaram índices de sobrevivência de 70-100por cento, contrastando com as culturas não tratadas com a bactéria que apresentaram índice de sobrevivência entre 30-60por cento. M. leprae foi capaz de proteger as CS da morte de maneira dose-dependente. A redução de células entrando em apoptose pela presença do bacilo também foi observada através da avaliação do potencial de membrana mitocondrial com o corante DiOC6 por Citometria de Fluxo. Em seguida demonstramos que fatores solúveis secretados pela célula incubada com M.leprae estão envolvidos na proteção, visto que o meio condicionado proveniente de culturas tratadas também promoveu a sobrevivência de CS. Possíveis candidatos para estes fatores de sobrevivência seriam os Fatores de Crescimento semelhantes à Insulina, IGF-I e IGF-II. Confirmamos, então, a capacidade de M. leprae induzir a expressão de IGF-I e IGF-II em CS através da técnica de RT-PCR. Também demonstramos que IGF-I recombinante adicionado às culturas foi capaz de proteger as CS ST 88-14 de morte induzida por privação de soro. A ação do IGF-I é possivelmente mediada pelo seu receptor...