Morphological characterization of brain cell cultures by controlled silver impregnation

RESUMEN

Dada la heterogeneidad del tejido nervioso, el uso de cultivos neurales como modelo de estudios neurobiológicos exige una caracterización precisa, tanto de los tipos celulares presentes en las monocapas como de su grado de diferenciación. Si bien la microscopía de contraste de fase ha sido el recurso más empleado en el análisis morfológico de los cultivos neurales, es reconocida la superioridad de la tinción con plata. Con el objeto de lograr una más fina caracterización celular, recurrimos a una técnica que habíamos desarrollado años atrás para la impregnación argéntica de fibras colágenas y reticulares. El procedimiento debió adecuarse a su aplicación a neuronas y astrocitos cultivados y, por tanto, inmaduros o en vías de maduración. Los pasos fundamentales consistieron en el uso de dicromato de potasio como mordiente, en forma previa a la impregnación argéntica, la que era seguida por reducción en solución formólica de gelatina, que actuaba como coloide protector. Los lavados posteriores se realizaron con etanol 95- cuando se pretendía destacar neuronas, o con agua piridinada cuando se trataba de astrocitos. En cultivos derivados de encéfalo de embrión de ratón, la plata precisó los variados tipos neuronales y su grado de maduración morfológica. Asimismo, en cultivos obtenidos de cerebro de ratón recien nacido, se logró caracterizar las sucesivas etapas de diferenciación astrocitaria. En neuronas y astrocitos madurados, la identificación fue confirmada por marcación (método PAP) de enolasa específica de neurona y proteína gliofibrilar ácida, respectivamente. La técnica propuesta, que puede definirse como impregnanción argéntica controlada, parece ser indicada para la caracterización morfológica de células neurales en cultivo, particularmente antes de la expresión de los marcadores específicos en toda la extensión de la monocapa