Diagnóstico de resistência do Mycobacterium tuberculosis à rifampicina utilizando-se da reação em cadeia da polimerase / Diagnostic of rifampicin-resistance of Mycobacterium tuberculosis by polymerase chain reaction

RESUMO

A resistência do Mycobacterium tuberculosis aos tuberculostáticos tem surgido como grande ameaça à Saúde Pública. A resistência à rifampicina pode ser considerada como um marcador para a multi-resistência a fármacos e tem sido atribuída a mudanças estruturais da RNA polimerase, produto de expressão do gene rpoB. Os pacientes portadores dessas cepas têm baixa perspectiva frente ao tratamento. Os testes convencionais de sensibilidade aos fármacos realizados em cultura do Mtb requerem várias semanas para o crescimento. Por este motivo, a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), método de baixo custo e que pode reduzir o tempo para o diagnóstico, representa alternativa viável e promissora. Neste artigo estão descritos os métodos mais comumente empregados na detecção de mutantes resistentes à rifampicina baseados na PCR, como análise de Polimorfismo Conformacional de Fita Simples (Single-Strand Conformation Polymorphism, SSCP), PCR Heteroduplex e INNO-LIPA. Recentemente, padronizou-se a técnica de PCR em baixa estringência, usando um único iniciador (Low Stringency Single Specific Primer, LSSP), que se mostrou um método rápido e sensível na detecção de mutações no gene rpoB.

ABSTRACT

The resistance of Mycobacterium tuberculosis to tuberculostatic drugs has emerged as a major public health threat. The resistance to rifampicin which has been attributed to structural changes in RNA polymerase can be considered as a marker for multi-drug-resistance to tuberculosis (MDR-TB). Patients bearing rifampicin-resistant strains have poor diagnosis even with treatment. Conventional culture-based drug sensibility testing can require several weeks due to the growth. In this paper we describe the most common PCR-based methods for detection of mutations that lead to rifampicin resistance, such as Single-Strand Conformation Polymorphism (SSCP), PCR Heteroduplex and INNO-LIPA. Recently, by Low Stringency using a Single Specific Primer (LSSP) assay, it was standardized a protocol that showed to be rapid and sensitive for the detection of mutations in the rpoB gene.