Production of extracellular protease by a Brazilian strain of Beauveria bassiana reactivated on coffee berry borer, Hypothenemus hampei

ABSTRACT

Studies were carried out on extracellular protease production by Beauveria bassiana CG432 in liquid medium containing glucose and yeast extract. B. Bassiana presented active growth after lag period of 24 h., produced 80 percent of the total of the extracellular protease activity in 48 h which was maximum on the 5th culture day. The extracellular protease presented optimum activity at 60°C, was stable up to 1M Cl-, maintained the stability during 15 day at 4°C and -18°C, but was not stable if frozen repeatedly.

RESUMO

A cepa brasileira do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana CG432 foi cultivada em meio de cultivo líquido contendo glucose e extrato de levedura a 28°C, 150 rpm, durante 9 dias utilizando 1 por cento de inóculo constituído por 10(8)conídios/mL pré-ativados em insetos vivos de broca-do-café. Avaliou-se diariamente o crescimento do fungo através da quantificação da biomassa e a atividade de proteases extracelulares no filtrado do cultivo pela determinação de peptídeos solúveis liberados pela hidrólise de soro albumina bovina a 37°C durante 30minutos. O fungo cresceu ativamente após reduzido período lag de 24 horas, produziu 80 por cento da atividade total de proteases em 48 horas e atingiu produção máxima em 5 dias de cultivo, sem adição de substratos indutores no meio de cultivo. As proteases apresentaram atividade ótima a 60°C, estabilidade até 1M de íons cloreto, mantiveram mais de 80 por cento de atividade durante 15 dias a 4°C e -18°C, porém foram sensíveis a congelamentos repetitivos.