Estudo das bases mecanísticas da diferenciação neuronal mediada pela atividade de `Ca POT. 2+' através dos receptores purinérgicos e colinérgicos / Study of mechanistic bases of neuronal differentiation mediated by 'Ca POT. 2+' activity through purinergic and cholinergic receptors

RESUMO

Muitos subtipos de receptores são ativados pelo mesmo ligante, mas estão acoplados a diferentes mensageiros secundários podendo produzir sinalização divergente em uma célula, enquanto receptores ativados por diferentes ligantes, mas que compartilham o mesmo mensageiro secundário, podem produzir sinalização convergente. Para examinar as bases mecanísticas que influenciam a proliferação e a diferenciação celular determinamos as funções de liberação intracelular de 'Ca POT. 2+' e a excitabilidade celular mediada pelos receptores purinérgicos e colinérgicos utilizando imageamento de cálcio por microscopia confocal. Para tanto, caracterizamos a participação dos subtipos P2'X IND. 1-7' e P2'Y IND. 1,2,4,6' de receptores purinérgicos aos níveis dos transcritos de mRNA e de expressão protéica, assim como pela atividade de induzir os transientes de '['Ca POT. 2+'] IND. i', aumento na concentração livre de cálcio intracelular, durante a diferenciação neuronal de células P19 de carcinoma embrionário, que foram utilizadas como modelo in vitro para o desenvolvimento neuronal precoce. Em células embriônicas os receptores P2'Y IND. 1,2', P2'X IND. 4' ou os heteromultímeros de P2X com farmacologia semelhante ao do receptor P2'X IND. 4' foram os responsáveis pelos transientes de '['Ca POT. 2+'] IND. i' induzidos pelo ATP e seus análogos. Ao término da diferenciação neuronal, os receptores P2'Y IND. 2,6' e P2'X IND. 2' foram os principais mediadores das respostas de '['Ca POT. 2+'] IND. i'. Obtivemos evidências do envolvimento destes receptores na indução da proliferação tanto de células embriônicas como de progenitores neuronais, por ensaios de incorporação de BrdU, e da indução da diferenciação neuronal das células progenitoras, na presença de vários agonistas e antagonistas de receptores purinérgicos...