Biochemical and pharmacological characterization of octylglucoside-solubilized muscarinic receptors derived from bovine tracheal smooth muscle

RESUMEN

La actividad de receptor colinérgico muscarínico fue investigada en las fracciones subcelulares del músculo liso traqueal de bovino. Esta actividad de receptor muscarínico fue determinada mediante un ensayo basado en la unión específica del H-QNB (antagonista muscarínico Bencilato de Quinuclidinilo tritiado) utilizando un método simple y reproducible que permite separar el ligando radioactivo que se encuentra libre del unido, mediante un procedimiento de centrifugación en columnas; lo cual permite obtener valores muy bajos como "blanco". Esta actividad de receptor muscarínico fue encontrada enriquecida 4 veces en la fracción microsomal (P) con respecto al Extracto original y después de una etapa adicional de purificación utilizando un gradiente discontinuo de sacarosa se concentró 7 veces dicha actividad en la fracción de membranas plasmáticas (P-1). A partir de esta fracción de membranas plasmáticas enriquecida en receptor muscarínico y utilizando un método original que emplea un detergente no iónico como es el Octilglucósido al 1% se obtuvo una fracción de receptor muscarínico "solubilizado", después de centrifugar a 200.000 x g x 30 min. El material solubilizado fue filtrado a través de una columna de Sephadex G-50, con la finalidad de remover el detergente y el eluente obtenido de esta columna se denominó receptor muscarínico "solubilizado". El procedimiento descrito inicialmente para evaluar la interacción entre el receptor muscarínico y el H-QNB, también permite determinar bajo las mismas condiciones experimentales, la unión del H-QNB, tanto a los receptores muscarínicos unidos a las membranas plasmáticas como a los receptores presentes en el "solubilizado". Se encontró que el receptor muscarínico "solubilizado" y el asociado a las membranas plasmáticas mostraron idénticas propiedades bioquímicas y farmacológicas