Un nuevo método radiorreceptor para la cuantificación de benzodiazepinas en fluidos biológicos / A new radioreceptor method for the quantification of benzodiazepines in biological fluids

RESUMEN

Se desarrolló un método radiorreceptor, relativamente rápido y de bajo costo, para determinar concentraciones de benzodiazepinas en fluidos biológicos. El método se basa en el hecho que la cantidad de [3H]-flunitrazepam incorporada específicamente, por fotomarcado, en receptores de membranas sinaptosomales, está relacionada cuantitativamente con la cantidad de benzodiazepina no radiactiva presente en el medio de incubación. Después del fotomarcado, las membranas fueron tratadas con ácido tricloroacético, y el sedimento obtenido fue lavado con acetona para eliminar el [3H]-flunitrazepam remanente, no unido. La preparación de receptor, constituida por membranas liofilizadas obtenidas a partir de corteza de cerebro bovino, fue estable durante seis meses por lo menos. El análisis estadístico de los gráficos logit-log de las curvas de desplazamiento con varias benzodiazepinas, mostró los siguientes valores de IC50 clonazepam, 1,6 nM; flunitrazepam, 3,8 nM; nitrazepam, 15,3 nM; diazepam, 43,2 nM; y clorodiazepóxido, 7,4 micronM, valores que se correlacionaron significativamente con los correspondientes valores determinados por otro método. Los valores de concentración correspondientes a benzodiazepinas no identificadas, extraídas de sangre, fueron expresados en equivalentes de diazepam. La sensibilidad para diazepam fue 3,3 nM, y los niveles de dosis entre 15 y 138 nM, mostraron valores de coeficiente de variación intra e inter ensayo, variando desde 3,4 a 12,2%, y desde 13 a 30,7%, respectivamente