Identificación de Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae y Neisseria meningitidis por reacción en cadena de la polimerasa / Identification of Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae and Neisseria meningitidis by polymerase chain reaction

RESUMEN

Introducción. Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae y Neisseria meningitidis son los principales patógenos humanos causantes de meningitis. Objetivo. Se evaluaron los iniciadores omp2, lytA y crgA en el desarrollo de una reacción en cadena de la polimerasa múltiple, para la identificación simultánea de los tres principales microorganismos responsables de la meningitis bacteriana. Materiales y métodos. Se evaluaron en un formato de PCR múltiple los iniciadores para la proteína de membrana externa ( omp2, 1.000 pb) de H. influenzae, la autolisina A ( LytA, 395 pb) de S. pneumoniae y el gen regulador de contacto A ( cgrA, 230 pb) de N. meningitidis y se determinó la sensibilidad y la especificidad de la técnica. Resultados. Se obtuvieron resultados reproducibles con una concentración de 50 nM de cada uno de los tres iniciadores y una temperatura de anillamiento de 57°C obteniendo una sensibilidad de 12,5 fg para H. influenzae y S. pnemoniae y de 3,12 fg para N. meningitidis. No se presentaron reacciones cruzadas con otros microorganismos causantes de meningitis o relacionados con los géneros. Conclusión. Los resultados de sensibilidad y especificidad sugieren que los iniciadores evaluados pueden ser utilizados para el desarrollo de una PCR en formato múltiple que permita la identificación de los tres principales patógenos causantes de meningitis.

ABSTRACT

Introduction: Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae and Neisseria meningitidis are the main human pathogens that cause meningitis. Objective: Primers omp2, lytA and crgA were evaluated with H. influenzae, S. pnumoniae and N. meningitidis DNA in a multiplex PCR, determining the sensitivity and the specificity of the technique. Materials and methods: Primers for H. influenzae outer membrane protein (omp2, 1000 pb), S. pneumoniae autolysin (lytA, 395 pb) and N. meningitidis, contact regulated gene (crgA, 230 pb) were evaluated in a multiplex PCR, determining the sensitivity and the specificity of the technique. Results: Reproducible results were obtained with 50 nM of each of the three primers and annealing temperature of 57oC in the multiplex PCR, obtaining a sensitivity of 12.5 fg for H. influenzae and S. pneumoniae and 3.12 fg for N. meningitidis. No cross reactions with other microorganisms agents of meningitis or related with the genera, appeared. Conclusions: The results for sensitivity and specificity suggest that the evaluated primers can be used for the development of a PCR in a multiplex format to the identification of the three main pathogens that cause meningitis.