Molecular genetic differentiation of avian Escherichia coli by RAPD-PCR / Diferenciação molecular de Escherichia coli aviária por RAPD-PCR

ABSTRACT

Escherichia coli is one of the most important bacterial avian pathogens and a common inhabitant of the gastrointestinal tract of animals. Most pathogenic E. coli can not be differentiated biochemically or by classic microbiologic methods. Molecular typing methods, particularly PCR, facilitated epidemiological and ecological studies of bacteria. Here we describe the application of a random amplified polymorphic DNA- polymerase chain reaction (RAPD-PCR) for molecular genetic differentiation of E. coli isolates in Iran. In this study 58 E. coli isolates including 4 standard strains, 3 food originated isolates, 33 avian isolates, 8 isolates form diarrheic calves and 10 isolates from unweaned diarrheic lambs were analyzed by RAPD-PCR using primer 1247(5/-AAG AGC CCG T-3/). The RAPD analysis showed that these isolates could be grouped into 33 RAPD types and avian isolates were discriminated into 29 genotypes. It was shown that the primer could not differentiate E. coli isolated from lambs. Discriminatory index for entire isolates was 0.912 and for avian isolates was 0.990. We concluded that RAPD-PCR can be used as a method for molecular differentiation of E. coli isolates.

RESUMO

Escherichia coli é um dos patógenos aviários mais importantes e um habitante comum do trato gastrointestinal de animais. A maioria das cepas patogênicas não pode ser diferenciada por métodos bioquímicos ou outros métodos microbiológicos clássicos. Métodos de tipagem molecular, particularmente PCR, têm facilitado os estudos epidemiológicos e ecológicos a respeito desse microrganismo. Nesse estudo, descrevemos a aplicação do RAPD-PCR para a diferenciação molecular de isolados de E.coli do Irã. No estudo, 58 isolados, incluindo 4 isolados padrão, 3 isolados de alimentos, 33 isolados de aves, 8 isolados de bezerros diarréicos e 10 isolados de carneiros diarréicos foram analisados por RAPD-PCR com o primer 1247 (5'-AAG AGC CCG T-3'). A análise mostrou que esses isolados podiam ser agrupados em 33 tipos RAPD, sendo os isolados de aves agrupados em 29 genótipos diferentes. Verificou-se que o primer utilizado não diferenciou os isolados de carneiros. O índice discriminatório para todos os isolados foi 0,912 e para os isolados de aves foi 0,990. Concluiu-se que o RAPD-PCR pode ser usado como método para diferenciação molecular de isolados de E. coli.