Padronização de PCR quantitativo e desenvolvimento de metodologia de detecção de norovírus em alimentos / Quantitative standardization of PCR and development of methodology of detention of norovírus in foods

RESUMO

A gastroenterite de origem alimentar é um problema de saúde pública em todo o mundo. Neste âmbito, a investigação da presença de vírus em alimentos se torna uma exigência, principalmente devido ao crescente número de surtos de gastroenterite relacionados ao consumo de alimentos e em particular, frutas, hortaliças, leite, ostras e água contaminados. Atualmente, os norovírus (NV) são reconhecidos como importantes agentes etiológicos de surtos de gastroenterite de origem alimentar em países desenvolvidos, embora pouco se saiba sobre o papel destes vírus nos países em desenvolvimento. O presente estudo teve como objetivo estabelecer método de amplificação para detecção quantitativa utilizando a técnica de reação em cadeia pela polimerase quantitativa (qPCR) para NV genogrupos (G) I e II e desenvolver metodologia de recuperação e detecção de NV GII em amostras de alimentos (queijo tipo Minas e alface). O qPCR padronizado que tem como alvo de amplificação a junção da região de leitura aberta 1 e 2 dos NV GI e GII, apresentou limite de detecção de 5 cópias de genoma viral por reação para ambos os testes. A metodologia de recuperação e detecção baseou-se na eluição dos vírus, seguida de clarificação e concentração utilizando membrana negativamente carregada e eluição em solventes inorgânicos. Na superfície de ambas as amostras de alimento foram semeadas 50microlitro de suspensão fecal contendo aproximadamente 10(elevado a 6)/microlitro partículas de NV GII ou diluições seriadas na base 10 desta suspensão. A eficiência de recuperação de NV variou de 5,2 a 72% para as amostras de alface e de 6,0 a 56,3% para as amostras de queijo tipo minas nas diferentes diluições utilizadas. Os resultados observados mostraram que o método desenvolvido foi eficiente para a recuperação e detecção de NV, podendo ser aplicado para pesquisa viral direta nas matrizes de alimentos testados. A padronização de métodos moleculares para a detecção de NV em alimentos tem...