Detecção molecular de Paracoccidioides brasiliensis em amostras de tecido e sangue periférico de pacientes portadores de Pacoccidioidomicose: correlação com perfis histopatológico, sorológicos e produção de TNF-alfa / Molecular detection of Paracoccidioides brasiliensis in tissue samples and peripheral blood of patients with Paracoccidioidomycosis: correlation with histopathological profiles, and production of serum TNF-alfa

RESUMO

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença granulomatosa sistêmica, causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, um fungo imperfeito e termodimórfico. Embora o contágio ocorra principalmente pela via aérea, as vias transcutânea e mucosa não devem ser desconsideradas, devido à possibilidade de invasão através de pele ou mucosas. No presente estudo, a detecção molecular de P. brasiliensis por Nested-PCR foi realizada em fragmentos de biópsias de lesões cutâneo-mucosas de pacientes com PCM ativa e comparada a outras técnicas utilizadas como rotina no diagnóstico dessa micose. Para tanto, amostras de 29 pacientes atendidos no Serviço de Dermatologia, da Faculdade de Medicina de Botucatu/UNESP, foram coletadas no período de abril/2004 a abril/2007. Na análise histopatológica observou-se granulomas compactos bem organizados, algumas vezes ao lado de áreas contendo granulomas frouxos mal definidos. Tal técnica foi positiva em todas as amostras avaliadas, com presença de grande quantidade de células fúngicas em 65,5% dos casos, algumas com multi-brotamentos. Para as análises sorológicas, na técnica de ELISA, 74,1% dos casos apresentaram títulos de 1/12800, 11,1% apresentaram 1/3200, 3,7% apresentaram 1/800 e 11,1% foram negativos. Já para imunodifusão (ID), 3,5% apresentaram título de 1/512, 55,1% apresentaram títulos de 1/32, 3,5% apresentaram 1/16, 3,5% apresentaram 1/8, 10,3% apresentaram 1/4, 6,9% apresentaram 1/2 e 17,2% foram negativos. Foi observado um aumento nos níveis de TNF-alfa , nos pacientes na forma grave, produzido por monócitos não estimulados, em comparação à forma leve e moderada, e ao controle. A produção desta citocina por monócitos estimulados com LPS também se mostrou gradativamente maior quanto maior a gravidade dos pacientes. Além disso, na análise do seguimento dos pacientes nota-se uma diminuição significativa nos níveis da citocina no período 60 dias pós-início do tratamento em comparação com o período pré-tratamento...