Detecção de ß-globina PCR em amostras citológicas cérvico-uterinas: estudo retrospectivo / PCR ß-globin detection in cytological uterine cervix samples: retrospective study

RESUMO

Estudos retrospectivos com a sensível técnica da polymerase chain reaction (PCR) feitos em esfregaços previamente corados por Papanicolaou pode revelar importantes parãmetros sobre o comportamento biológico das alterações citológicas provocadas por infecções virais e outros agentes mutagênicos. Para isso, o domínio metodológico das reações deve ser confiável e factível. O objetivo do presente estudo foi avaliar a extração do DNA da ß-globina por PCR nas amostras cérvico-uterinas em várias condições de preparo para avaliação da qualidade do DNA sob a ação de fixadores, corantes e sua relação com o protocolo utilizado. Para tanto, testou-se esfregaços citológicos preparados sob diferentes condições técnicas de fixação, coloração e montagem. As principais condições envolveram fixação em álcool e carbowax esfregaços corados e não corados, montagem com lamínula ou não, e ainda descoloração com HCI. Os primers usados para identificação da ß-globina foram PCO3 5' - ACACAACTGTGTTCACTAGC - 3' e PCO 4 5' - CAACTTCATCCACGTTCACC - 3'. O conteúdo de DNA extraído e quantificado variaram de 23,46 ng/µL. Somente amostras fixadas em álcool 100% e carbowax sem a coloração pelo método de Papanicolaou amplificaram 110 pares de bases do gene de ß-globina. Pelo protocolo analisado ficou evidente que estudos retrospectivos em séries previamente coradas pelo método de Papanicolaou apresentam importantes limitações para suas realizações. Para superar essas limitações temos que estudar novos protocolos que superem os fatores inibitórios oriundos dos processos de fixação e sobre tudo coloração.

ABSTRACT

Retrospective studies with polymerize chain reaction (PCR) methodology in cytological smears previously stained with Papanicoloau could reveal important parameters about the biological behavior of cytological alterations induced by viral infection and another mutagenic agents. To obtain such informations, methodology should be reliable. The goal of this study was to evaluate the extraction...