Molecular Tool for Identification of Closely Related Species of Trichogramma (Hymenoptera: Trichogrammatidae): T. rojasi Nagaraja & Nagarkatti and T. lasallei Pinto / Técnica Molecular para a Identificação de Espécies Próximas de Trichogramma (Hymenoptera: Trichogrammatidae): T. rojasi Nagarkatti & Nagaraja e T. lasallei Pinto

RESUMO

O sequenciamento da região ITS2 (espaço interno transcrito) do rDNA foi utilizado para identificar duas espécies próximas de Trichogramma T. rojasi e T. lasallei, esta última recentemente constatada no Brasil. O DNA das amostras foi extraído utilizando-se Chelex 100. O produto de PCR foi ligado ao vetor pGEM-T ® e ambos foram então acondicionados em placas de Petri para o crescimento de colônias brancas, o que constata a ligação correta entre o vetor e o DNA. A partir dessas colônias, uma pequena quantidade (10æl) foi purificada utilizando material específico e seqüenciada. As seqüências foram alinhadas pelo programa ESEE 3.0. Os primers específicos utilizados para a amplificação do rDNA da região ITS2 das espécies de Trichogramma estudadas foram eficientes. O sequenciamento das duas espécies diferiu em comprimento e posição dos nucleotídeos, mostrando que são distintas. Os resultados mostraram que esta é uma boa técnica para identificação de espécies crípticas de Trichogramma, difíceis de identificar quando são utilizados apenas caracteres morfológicos.

ABSTRACT

The sequence of the ITS2 (internally transcribed spacer 2) region of the rDNA was used to identify two closely related Trichogramma species T. rojasi and T. lasallei, the second species recently reported in Brazil. The DNA of the samples was extracted using Chelex 100. The PCR product was linked to a pGEM-T® vector and both were then placed into Petri dishes to grow white colonies, which demonstrate the correct ligation between the vector and the DNA. From these colonies, 10æl were purified and sequenced using a special kit, and the sequences aligned using the ESEE 3.0 software. Specific primers were efficient to amplify the ITS2 rDNA region of the Brazilian Trichogramma. The sequence of each species differed in length and in nucleotide position, showing that they are distinct. Thus, the results show that this technique is a good tool to identify Trichogramma cryptic species, otherwise difficult to identify when using only morphological characters.