Aproximaciones de bioquímica clásica al estudio de la relación entre la estructura y la función de la rodopsina Y / Approaches to the study of classical biochemistry of the relationship between structure and function of the rhodopsin
Arch. venez. farmacol. ter
;
27(1): 5-13, 2008. ilus
Artigo
em Espanhol
| LILACS
| ID: lil-517093
RESUMEN
La proteína fotorreceptora rodopsina (R) fue extraída de los segmentos externos de los bastoncillos de retinas bovinas con el detergente n-dodecil β-D-maltósido (DM) y purificada a homogeneidad mediante cromatografía de afinidad. El entrecruzamiento químico de la R y de la rodopsina fotoactivada (R*) con los agentes bifuncionales sulfo-succinimidilo 4-(N-maleimidometilo) ciclohexano-1-carboxilato (sulfo-SMCC) o m-maleimidobenzoilo-N-hidroxisuccinimido ester, sugirieron la naturaleza oligomérica de la proteína fotorreceptora. La caracterización de los parámetros hidrodinámicos de la R y la R* en presencia de 0.1% DM, mediante cromatografía de exclusión molecular y sedimentación sobre gradientes de sacarosa, permitió estimar los tamaños de los complejos R:DM y R*: DM. Los resultados concuerdan con una estructura cuaternaria dimérica tanto para la R como para la R*. La R entrecruzada con sulfo-SMCC, en presencia de luz, fue estabilizada en un fotointermediario que absorbió a ~ 470 nm. Experimentos de proteólisis con termolísina sobre los dímeros nativos de R y sobre los monómeros de R generados por medio del uso de altas concentraciones de DM, complementados con estudios de modelaje basados en la estructura cristalina reportada de la proteína, sugirieron que el reactivo sulfo-SMCC generó un entrecruzamiento intramolecular entre la Cys140 y la Lys248 de la R, el cual posiblemente es el responsable de la incapacidad de la proteína de sufrir el cambio conformacional requerido para llegar a su estado fotoactivado.
Texto completo:
DisponíveL
Índice:
LILACS (Américas)
Assunto principal:
Retina
/
Rodopsina
/
Percepção Visual
/
Dimerização
/
Hibridização Genética
Tipo de estudo:
Estudos de avaliação
Limite:
Animais
Idioma:
Espanhol
Revista:
Arch. venez. farmacol. ter
Assunto da revista:
Farmacologia
/
Terapêutica
Ano de publicação:
2008
Tipo de documento:
Artigo
País de afiliação:
Cuba
Instituição/País de afiliação:
Universidad Simón Bolívar/VE
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