Detecção de DNA de Leishmania spp. em sangue periférico para o diagnóstico da leishmaniose visceral humana / Detection of DNA of Leishmania spp. in peripheral blood for diagnosis of human visceral leishmaniasis

RESUMO

Avaliou-se a reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando iniciadores que amplificam a região conservada do kDNA do mini-círculo mitocondrial de Leishmania spp. para o diagnóstico da leishmaniose visceral (LV) em sangue periférico. O limite de detecção foi de 4,5 atg de DNA total de Leishmania (Leishmania) chagasi (equivalente a 4,5x10-5 parasito). kDNA de Leishmania spp. foi detectado no sangue periférico de 47 entre 53 (89 por cento) pacientes portadores de LV. Não se detectou DNA de Leishmania spp. no sangue periférico de 15 voluntários não-expostos (Detection of circulating Leishmania chagasi DNA for the non-invasive diagnosis of human infection, Trans Royal Soc. Trop. Med. Hyg, in press). A presença de DNA circulante de Leishmania spp. antes, durante e 61 a 259 dias após o tratamento da LV foi avaliada em 20 pacientes. Dezessete deles (85 por cento) apresentaram PCR positivo antes do tratamento. Em 16 (94 por cento) entre este 17 a DNA deixou de ser detectado até a primeira semana após o termino. Apenas uma paciente apresentou PCR positivo durante todo tempo de acompanhamento (259 dias), apesar de recuperação clínica completa (Clearance of circulating Leishmania kDNA after treatment of human visceral leishmaniasis, enviado para publicação). Um oligonucleotídeo Leishmania donovani complexo-específico e, complementar à uma seqüência interna da região conservada do mini-círculo, foi desenhado e utilizado como iniciador reverso adicional ao par de iniciadores que amplificam a região conservada, em ensaio "PCR multiplex". Os isolados de referência pertencentes ao complexo Leishmania donovani geraram os produtos complexo e gênero-específico, também identificados em sangue periférico de 20 pacientes com LV. Isolados de outros complexos apresentaram somente o produto gênero-específico (Single step multiplex-kDNA-PCR for detection of Leishmania donovani complex in human peripheral blood samples, enviado para publicação). É descrita a caracterização de L. (L.) chagasi isolada de lesão cutânea de um paciente portador de co-infecção Leishmania/HIV com manifestações viscerais e cutâneas, através de eletroforese enzimática e por análise de polimorfismos em fragmentos de DNA (Identification of Leishmania chagasi from skin in Leishmania/HIV co-infection a case report).