Molecular weight estimation of esterase isoenzymes in closely related Drosophila Species (Diptera: Drosophilidae) in non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis

ABSTRACT

A method that allows the measure of molecular weight of two well-known and closely related esterases from Drosophila mojavensis and its sibling species, D. arizonae, is here described, using native polyacrylamide gel electrophoresis at several concentrations, applying Fergunson´s principles. These enzymes, namely EST-4 and EST-5, presented molecular weight values between 81 and 91 kDa. In spite of their distinct expression pattern through the insect's life cycle, they showed properties of isoenzymes codified by distinct structural genes, supporting the hypothesis of a rather recent gene duplication event that generated both in D. mojavensis and D. arizonae, as well as in other species of repleta group. The method is simple and adequate to be applied to preliminary molecular weight determination of other enzymes without any previous purification procedure.

RESUMO

Neste trabalho, um método que permite a estimativa do peso molecular de duas esterases conhecidas e intimamente relacionadas, encontradas em Drosophila mojavensis e sua espécie aparentada D. arizonae, é descrito. Este método é realizado utilizando a técnica de eletroforese em diferentes concentrações de gel e aplicando os princípios de Fergunson. As enzimas, denominadas EST-4 e EST-5, apresentaram pesos moleculares entre 81 e 91 kDa. Apesar de seus padrões diferenciados de expressão durante o ciclo de vida do inseto, elas demonstraram propriedades de enzimas codificadas por genes estruturais distintos, corroborando a hipótese de um evento de duplicação gênica recente que gerou ambas em D. mojavensis e D. arizonae, bem como em outras espécies do grupo repleta. O método proposto é simples e adequado para ser utilizado em estimativas preliminares de determinação de pesos moleculares de outras enzimas sem haver a necessidade de um procedimento prévio de purificação.