Traducao "in vitro" e transcricao reversa do mRNA de procolageno. / Translation \"in vitro\" and reverse transcription of procollagen mRNA

RESUMO

Uma fracao de RNA mensageiro (mRNA) foi isolada a partir de RNA total extraido de polissomos de embrioes de galinha e purificada por dois ciclos de cromatografia em oligo (dt) - celulose. A analise deste material por eletroforese em condicoes denaturantes revelou a presenca de um pico homogeneo de moleculas, com um coeficiente de sedimentacao em torno de 28S. A adicao deste mRNA a um sistema de sintese proteica derivado de reticulocitos de coelho induziu a formacao de polipeptideos sensiveis a colagenase bacteriana purificada, com mobilidade eletroforetica igual a das cadeias do procolageno padrao. DNA complementar (cDNA) a mRNA de procolageno foi obtido pelo uso de transcriptase reserva. A analise deste cDNA em gel de agarose alcalino, revelou um tamanho medio correspondente a 565000 daltons. Atraves de experimentos de hibridizacao dos cDNAs de procolageno e globina com seus respectivos mRNAs, em que se assumiu a pureza da preparacao do mRNA de globina como 100%, pode-se estimar, por comparacao, que o mRNA de procolageno apresenta-se 78% puro