Uso da citometria de fluxo para identificar marcadores biológicos e alvos terapêuticos la leishmaniose cutânea humana / Use of flow cytometry to identify biological markers and therapeutic targets human cutaneous leishmaniasis

RESUMO

Os receptores FCy constituem uma interface entre as respostas imunes celular e humoral, os quais parecem decisivos e antagonizam-se na patogênese da leishmaniose humana. Foi estudada então a expressão destas moléculas como possíveis marcadores clínicos e biológicos na leishmaniose cutânea, como já foi estabelecido em diversas doenças infecciosas e auto-imunes. Quantificou-se a expressão dos receptores Fcy (CD16, CD32 e CD64) no sangue periférico de pacientes com leishmaniose cutânea (LC) através de citometria de fluxo como também níveis de Fas (CD95) por ser estimulado por IFN-y como o CD64. Analisamos os resultados obtidos de pacientes de duas coortes da área endêmica de Jequié/Jiquiriçá-BA, comparando com o grupo de controles sadios da área urbana de Salvador-BA, e correlacionando com a resposta imune ex vivo e apresentação e evolução clínica. Observamos que a expressão ex vivo de CD 16 em monócitos estava significativamente aumentada em pacientes com LC e correlacionava-se positivamente com tamanho de lesão e níveis de TGF-beta plasmático. O CD32 estava aumentado em pacientes com LC porém não estava correlacionado com a apresentação clínica. A expressão ex vivo de Fas estava significativamente aumentada em monócitos, linfócitos e neutrófilos de pacientes com LC e correlacionou negativamente com tempo de cura. A expressão ex vivo de CD64 em monócitos de pacientes com leishmaniose cutânea estava aumentado signficativamente e correlacionou positivamente com resposta terapêutica ao antimônio pentavalente. Por outro lado, o CD64 mostrou-se um promissor alvo terapêutico num modelo experimental de inflamação cutânea. Demonstramos que o tratamento in vitro com imunotoxinas dirigidas contra CD64 induziu apoptose e diminuiu significativamente a sobrevivência de Leishmania amazonensis em macrófagos humanos infectados, projetando o seu possível uso terapêutico. Em conclusão, validamos o uso de citometria de fluxo para identificar marcadores clínicos na leishmaniose cutânea, implicando na existência de efeitos sistêmicos da infecção que podem ser avaliados no sangue periférico.