Diagnóstico molecular da toxoplasmose cerebral: comparação de diferentes marcadores utilizados na PCR para detecção de Toxoplasma gondii em pacientes com aids / Molecular diagnosis of cerebral toxoplasmosis: comparison of different markers used in PCR for detection of Toxoplasma gondii in aids patients

RESUMO

Introdução: A toxoplasmose cerebral é uma das lesões focais cerebrais de maior importância em pacientes com aids. Este estudo teve como objetivo aprimorar o diagnóstico molecular da toxoplasmose cerebral. Métodos: Esta dissertação foi dividida em 2 partes Uma retrospectiva, para PCR convencional (cnPCR), onde avaliou-se 2 marcadores moleculares de T. gondii (TG1-TG2 tendo como alvo um fragmento do gene B1 e TOX4-TOX5, um fragmento da região repetitiva de 529 pb); A outra, prospectiva, onde padronizou-se e validou-se 2 protocolos de PCR em tempo real qualitativa (qrtPCR) utilizando-se os marcadores B1TgF-B1TgR e RETgF-RETgR tendo como alvo, também, o gene B1 e o fragmento de 529 pb. Em ambas as etapas do estudo, o método controle foi a cnPCR utilizando-se o marcador B22-B23. Resultados: Na primeira etapa foram analisadas 102 amostras de DNA extraídas de sangue provenientes de pacientes com aids e com diagnóstico clínico já estabelecido. Destes, 66 possuíam toxoplasmose cerebral e 36, outras infecções oportunistas. Comparando os resultados dos 2 marcadores estudados com o B22-B23, obtiveram-se sensibilidades de 95.5%, 93.9% e 89.3%; especificidades de 97.2%, 88.9% e 91.7% para B22- B23, TG1-TG2 e TOX4-TOX5 respectivamente. A associação de pelo menos 2 marcadores aumentou a sensibilidade e especificidade. Os índices de concordância entre 2 marcadores variou de 83.3% a 93.1%. Apesar de todos os marcadores apresentarem boa sensibilidade na detecção de T. gondii, B22-B23 ainda foi o melhor. A associação de 2 marcadores aumentou a sensibilidade, porém demandou mais tempo e custo. Na segunda parte foram analisadas 149 amostras de DNA extraídas de sangue e liquidocefalorraquidiano provenientes de pacientes com aids, e achados clínicos e radiológicos conhecidos. O diagnóstico laboratorial incluiu cnPCR (B22-B23), imunofluorescência indireta e duas qrtPCR (B1Tg e RETg) com o sistema TaqMan probe FAM dye-labeled. A sensibilidade...