Detección de la subunidad NMDAR-1 del receptor N-metil-D-asparato (NMDAR) en el hipotálamo del ovino mediante el análisis de Western blot / Detection of the N-methyl-D-asparate receptor subunit-1 (NMDAR-1) in the hypothalamus of the sheep bye Western blot analysis

RESUMEN

Los aminoácidos excitatorios (AAEs), L-glutamato y aspartato, son considerados las principales sustancias endógenas neuroactivas involucradas en la transmisión excitatoria. El receptorN-metíl-D-aspartato (NMDAR) es uno de los principales receptores de los AAEs. Este receptor estimula la secreción de la hormona luteinizante (LH) al facilitar la secreción de la hormona liberadora de las gonadotrofinas (GnRH). En este estudio se plantearon dos objetivos: Estandarizar la técnica de Western blot para identificar la subunidad-1 del NMDAR (NMDAR-1) en hipotálamo del ovino; y determinar si existe diferencia en la distribución de la NMDAR-1 en los diferentes cuadrantes hipotalámicos (cuadrantes dorsal-rostral, ventral-rostral, dorsal-caudal, y ventral-caudal) del ovino. Se utilizaron 100 µg de proteína total para identificar la NMDAR-1 en el hipotálamo ovino. Se evidenció un efecto del cuadrante o porción del hipotálamo ovino sobre la expresión proteica de la NMDAR-1. En particular, el cuadrante dorsal-rostral (31,5567 densidad óptica ± 13,0831;P<0,05) expresó más cantidad del receptor que el cuadrante ventral caudal (17,1517 densidad óptica ± 13,0831; P<0,05) y que el cuadrante ventral-rostral (16,4683 densidad óptica ±13,0831; P<0,05). Estos resultados demuestran que el receptor NMDA se expresa más en la región rostral del hipotálamo del ovino, área en la cual se encuentran distribuidos los cuerpos celulares y axones de las neuronas productoras de GnRH. Estos resultados sugieren la participación de la vía glutamatérgica en la regulación de la reproducción de los ovinos.

ABSTRACT

The excitatory amino acids (EAAs), L-glutamate and aspartate, are considered the major endogenous neuroactive substances involved in excitatory neurotransmission. The N-methyl-D-aspartate receptor (NMDAR) is one of the main excitatory amino acid receptors. Exogenous activation of the NMDAR results in the release of gonadotrophin-releasing hormone (GnRH) from the hypothalamus and subsequent release of luteinizing hormone (LH) from the anterior pituitary. The present study had two aims: to standardize the optimal amount of total protein required to identify the NMDAR subtype-1 (NMDAR-1) in the hypothalamus of the sheep; to determine whether a difference exists in the distribution of NMDAR-1 in different hypothalamic regions (dorsal-rostral, ventral-rostral, dorsal-caudal, and ventral-caudal quadrant) in male sheep. The optimal amount of total hypothalamic protein required to visualize the NMDAR-1 was 100 µg. There was an effect of quadrant on the expression of NMDAR-1 in the hypothalamus of the intact male sheep. In particular, dorsal-rostral quadrant (31.5567 optical density ± 13.0831) expressed more receptor than ventral-caudal quadrant (17.1517 optical density ± 13.0831; P<0.05) and ventral-rostral quadrant (16.4683 optical density ± 13.0831; P<0.05). These data suggest that NMDAR is more expressed in the rostral area of the hypothalamus, where the cell bodies and axons of the GnRH neurons are localized. Thus, these data allow suggest that glutamatergic pathway potentially is involved in modulating the reproductive activity in the ovine.