Patrón de proteínas expresadas en promastigotes de Leishmania amazonensis (LTB0016) obtenido con el uso de la electroforesis en dos dimensiones / Patern of expressed protein in promastigotes of amazonensis Leishmania (LTB0016) obteined with the use of the two-dimensional electrophoresis

RESUMEN

Se realizaron varios ensayos con la finalidad de obtener un método de preparación del homogenato de promastigotes de Leishmania amazonensis, que proporcionará la resolución y reproducibilidad adecuada en los patrones de manchas proteicas. La resuspensión del sedimento de promastigotes con solución de lisis fresca, su posterior incubación por dos horas, la incorporación del DTT y anfolitos a la muestra justo antes de hidratar la tira proporcionaron las condiciones necesarias para lograr la resolución de las manchas proteicas en los geles en los cuales se corrieron los extractos del parásito. Un grupo de geles obtenidos utilizando tiras de 11 cm de longitud y rango de pH de 3-6 fueron analizados además usando el programa de análisis de imágenes PD Quest, con el cual se obtuvo un mapa de referencia de 400 manchas proteicas. Otro grupo de geles fue utilizado para experimentos de inmunodetección, las proteínas separadas por electroforesis en dos dimensiones fueron transferidas a una membrana de nitrocelulosa y enfrentada a suero de pacientes con leishmaniasis, estos sueros reconocieron un grupo de manchas proteicas con pesos moleculares que oscilan entre 14,5 y 66 kDa, estas manchas proteicas se obtuvieron con gran separación y resolución lo que facilitaría su posterior escissión para ulteriores estudios. Estos resultados son pioneros en el área del proteoma y son de gran valor para la identificación y estudio de las proteínas de Leishmania amazonensis (LTB0016). Los mismos permitirán en un futuro, entre otras cosas, comparar el mapa proteico de promastigotes en cultivo, con los de otros estadios de la misma u otra especie de Leishmania.