Estudo do perfil de expressão de componentes da via de sinalização sonic hedgehog em tumor odontogênico queratocístico e ameloblastoma: contribuição para o conhecimento da patogênese / Study of the expression profiles of components of the sonic hedgehog signaling pathway in tumor odontogenic keratocyst and ameloblastoma: a contribution to the understanding of the pathogenesis

RESUMO

O Tumor Odontogênico Queratocístico (TOQ) e Ameloblastoma (AB) são tumores benignos que se desenvolvem a partir de restos embrionários da lâmina dentária, através de mecanismos ainda pouco conhecidos. A via SHH está envolvida na patogênese de tumores, especialmente por participar da propagação de células-tronco tumorais através da ativação de programas relacionados a proliferação e sobrevivência celular. Este trabalho teve como objetivo caracterizar o perfil de expressão dos, componentes da via de sinalização SHH, nestes tumores, na tentativa de melhor compreender os mecanismos envolvidos na patogênese destas doenças. Após aprovação do CEP, 23 TOQs e 11 ABs foram obtidos durante os procedimentos cirúrgicos para tratamento dos pacientes. Duas mucosas não-neoplásicas e um folículo dentário foram doados por pacientes saudáveis. Para o estudo molecular, uma média de 3cm3 de cada tumor foi congelada em nitrogênio líquido e o restante do material encaminhado para diagnóstico histopatológico e utilizados para o estudo histomorfológico e imuno-histoquímico. Após a extração do RNA total utilizando microcolunas de sílica (Rneasy Mini KitTM, QIAGEN, Tokyo, Japan), a transcrição reversa foi realizada utilizando a enzima Superscript IITM (Invitrogen Corporation, Carlsbad, Califórnia, USA). As amostras foram submetidas a reação de PCR quantitativo para avaliar o perfil de expressão dos genes da via SHH, CCND1 e BCL2. O estudo imuno-histoquímico para as proteínas CCND1 e BCL2 foi realizado utilizando o Sistema LSABTM (Dako Corporation, Carpinteria, USA). As reações moleculares foram analisadas segundo a fórmula estabelecida por PFAFFL (2001), enquanto a imunomarcação foi analisada considerando-se os critérios de semi-quantificação descritos por Gurgel et aI. (2008)...