La sobrexpresión génica vascular de NADPH oxidasa en la hipertensión arterial experimental se reduce solamente con inhibición directa de Rho kinasa / Vascular gene overexpression of NADPH oxydase in experimental hypertension is only reduced by direct Rho kinase inhibition

RESUMEN

Uno de los objetivos del tratamiento antihipertensivo, más allá de normalizar las cifras tensionales, es disminuir/regresar el remodelado patológico hipertensivo cardiovascular y renal, de manera de reducir eficientemente el riesgo dado por esta patología. Al respecto, la vía de señalización intracelular de la Rho kinasa (ROCK) es un mecanismo de vasoconstricción y de promoción de remodelado que podría ser un blanco atractivo en el tratamiento antihipertensivo. Objetivo: Evaluar a nivel vascular los niveles de TGF beta, la expresión génica vascular de NADPH oxidasa (fuente de stress oxidativo vascular), y el grado de inflamación parietal y su dependencia de ROCK en la hipertensión arterial (HTA) experimental. Métodos: Se compararon 5 grupos experimentales. Se usó el modelo de HTA por administración de deoxicorticosterona (DOCA, 100mg/Kg, sc una vez/semana) + sal en ratas Sprague Dawley uninefrectomizadas. Como controles, se usaron ratas uninefrectomizadas (Sham). Las ratas DOCA se randomizaron para recibir el inhibidor específico de ROCK fasudil (Fas, 50 mg/kg/d, por gavage, durante 3 semanas), desde la semana 3 post cirugía, o candesartán (Cand, 10 mg/kg/d, por gavage, durante 3 semanas), o fasudil (25 mg/kg/d) + candesartan (5 mg/ kg/d por gavage, 3 semanas ). Al finalizar los experimentos se midieron en la aorta los niveles de MYPT1 fosforilada/total, blanco de ROCK y estimador de su activación (por Western blot), de TGF beta (por Western blot), los niveles de mRNA de las subunidades p22 Phox y gp 91 de la NADPH oxidasa (por RT PCR) y el número de células infamatorias ED1 en anillos aórticos (por inmunohistoquímica). Resultados: La presión arterial sistólica aumentó en las ratas DOCA a 172 +/- 7 mm Hg (p < 0,05) y fue normalizada después de 3 semanas de tratamiento con candesartán, fasudil y de candesartán + fasudil. La actividad de ROCK en aorta aumentó en 4 veces en las ratas hipertensas (p < 0,05)...

ABSTRACT

Background: Rho kinase (ROCK) activity promotes vasoconstriction and pathological vascular remodeling in experimental hypertension. Our working hypothesis is that ROCK inhibition could be an attractive target to prevent vascular remodeling in hypertension. Objectives: We evaluated vascular TGF beta, the genic expression of NADPH oxydase (a vascular oxidative stress source) and its dependency from ROCK activation in experimental hypertension in the rat. Methods: Five experimental groups were compared. Hypertension was induced by the administration of salt and deoxycorticosterone acetate (DOCA, 100 mg/Kg, weekly) to unilaterally nephrectomized rats. Unilaterally nephrectomized rats were used as controls (controls). DOCA rats were randomized to receive either Fasudil (a ROCK inhibitor, 50 mg/Kg/day) or candesartan (CAND, 10 mg/Kg/day for 3 weeks), starting 3 weeks after surgery. The other group received fasudil (25 mg/Kg/day) plus CAND (5 mg/Kg/day) for 3 weeks. After treatment, phosphorilated MYPT1 (a ROCK target expressing ROCK activation) was measured in aortic wall rings by Western Blot. We also determined TGF-beta (Western Blot), p22 Phox and gp 91subnits of NADPH oxydase mRNA (RT-PCR) and the number of ED1 infammatory cells. Results: In DOCA rats, SBP increased to 172 +/- 7 mm Hg (p < 0,05), and returned to normal values after 3 weeks with candesartan, fasudil or both combined. In these rats, ROCK activity in aorta was increased 4 times (p < 0,05) and returned to control values in the 3 groups receiving treatment. p22 Phox and gp 91subnits of NADPH oxydase mRNA were increased by 80 and 90 percent, respectively (p<0,05). These changes were reduced to control values in rats receiving fasudil and candesartan + fasudil. Gene expression of TGF-beta increased 4 times, and the number of ED1...