Normalización de la técnica de neutralización por placas en las células Vero para los virus del dengue / Standarization of the plaque-reduction neutralization technique in Vero cells for dengue virus testing

RESUMEN

INTRODUCCIÓN: la técnica de neutralización por reducción del número de placas ha sido realizada en las células BHK-21 en Cuba desde hace más de 2 décadas, para la determinación de los anticuerpos neutralizantes a dengue. A finales de 2007, la OMS inició un programa para armonizar esta técnica en todos los laboratorios al nivel mundial. OBJETIVOS: en el presente estudio se trazó como objetivo principal la normalización de la técnica de neutralización, por reducción del número de placas en las células Vero procedentes del Laboratorio de Cultivo del Instituto de Medicina "Pedro Kourí". MÉTODOS: se emplearon las cepas virales propuestas por la OMS y las cepas del Banco de cepas del Laboratorio de Arbovirus, y un panel de sueros humanos de pacientes sospechosos de dengue con más de 5 d del comienzo de los síntomas. RESULTADOS: se demuestra que con las células Vero sembradas en suspensión se obtiene una mayor capacidad y calidad de plaqueo. Se obtuvieron resultados similares con las cepas del Banco de Arbovirus y con las cepas de referencia de la OMS. CONCLUSIONES: se logró normalizar la técnica de neutralización en las células Vero con resultados reproducibles a los obtenidos en BHK-21, pero con el consumo de un número mayor de días. La normalización de esta técnica permitirá relacionar los resultados de neutralización de los estudios epidemiológicos y de vacuna con los obtenidos por otros laboratorios al nivel internacional.

ABSTRACT

INTRODUCTION: the standard plaque reduction neutralization technique has been performed in BHK-21 cells for more than 20 years in Cuba to determine the neutralizing antibodies to dengue. At the end of 2007, the WHO implemented a program to harmonize this technique at all the laboratories worldwide. OBJECTIVES: the present study was aimed at standardizing the plaque-reduction neutralization technique in Vero cells from the Cultural Lab of "Pedro Kourí" Tropical Medicine Institute. METHODS: viral strains suggested by WHO, strains from the Strain Bank of Arbovirus Laboratory, as well as the panel of human sera from dengue-suspected patients after 5 days of the symptoms. RESULTS: it was proved that suspension- cultured Vero cells allow higher plaque capacity and quality. Similar results were reached using Arbovirus Bank strains and WHO reference strains. CONCLUSIONS: it was possible to standardize the plaque-reduction neutralization in Vero cells, with results similar to those of BHK-21 but in longer length of time. Standardization of this technique will allow comparing the outcome of neutralization in the epidemiological studies and vaccine research with those of other laboratories worldwide.