Proteína M recombinante do histoplasma capsulatum: mapeamento de epítopos e aplicação no diagnóstico da histoplasmose / Protein M recombinant histoplasma capsulatum: epitope mapping and application in the diagnosis of histoplasmosis

RESUMO

A histoplasmose é causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum. A infecção por este organismo é frequentemente diagnosticada pela determinação de anticorpos para a proteína M, imunodominante, mas o papel deste antígeno na patogênese da histoplasmose ainda permanece obscuro. A função do antígeno M não é conhecida, mas geneticamente é homóloga a catalases fúngicas. Em nosso estudo, nós procuramos determinar regiões imunodominantes do antígeno M, produzir um painel de anticorpos monoclonais contra esta proteína, caracterizá-los, usá-los para o mapeamento de epítopos, mostrar a localização do antígeno M na levedura do H. capsulatum, demonstrar a atividade de catalase desta proteína e desenvolver imunoensaios para a detecção de anticorpos contra esta proteína e antígeno M circulante nos fluidos corporais. Foi possível determinar peptídeos com maior atividade antigênica e suas localizações na molécula e caracterizá-los de acordo com as suas propriedades bioquímicas. Nós geramos três fragmentos que continham estes peptídeos e os utilizamos para avaliar a ligação dos anticorpos monoclonais e reconhecimento a cada fragmento separadamente. Um dos fragmentos, F3, mostrou maior ligação aos anticorpos monoclonais que os outros avaliados, entretanto estudos adicionais devem ser avaliados para um complete mapeamento. Para avaliar o papel do antígeno M na patogênese da histoplasmose, usando análise por imunoblot de um extrato de parede celular e membrana (CW/M) obtido de levedura, provamos que os mAbs gerados contra o antígeno M recombinante puderam reconhecer este antígeno no extrato utilizado...