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Protocols for obtainment and isolation of two mesenchymal stem cell sources in sheep / Protocolos para obtenção e isolamento de células tronco mesenquimais de duas fontes em ovinos
Fadel, Leandro; Viana, Brunno Rosa; Feitosa, Matheus Levi Tajra; Ercolin, Anna Caroline Mazeto; Roballo, Kelly Cristine Santos; Casals, Juliana Barbosa; Pieri, Naira Caroline Godoy; Meirelles, Flávio Vieira; Martins, Daniele dos Santos; Miglino, Maria Angélica; Ambrósio, Carlos Eduardo.
  • Fadel, Leandro; USP. Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science. Surgery Department. Sao Paulo. BR
  • Viana, Brunno Rosa; USP. Faculty of Animal Sciences and Food Engineering. Basic Sciences Department. Pirassununga. BR
  • Feitosa, Matheus Levi Tajra; USP. Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science. Surgery Department. Sao Paulo. BR
  • Ercolin, Anna Caroline Mazeto; USP. Faculty of Animal Sciences and Food Engineering. Basic Sciences Department. Pirassununga. BR
  • Roballo, Kelly Cristine Santos; USP. Faculty of Animal Sciences and Food Engineering. Basic Sciences Department. Pirassununga. BR
  • Casals, Juliana Barbosa; USP. Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science. Surgery Department. Sao Paulo. BR
  • Pieri, Naira Caroline Godoy; USP. Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science. Surgery Department. Sao Paulo. BR
  • Meirelles, Flávio Vieira; USP. Faculty of Animal Sciences and Food Engineering. Pirassununga. BR
  • Martins, Daniele dos Santos; USP. Faculty of Animal Sciences and Food Engineering. Pirassununga. BR
  • Miglino, Maria Angélica; USP. Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science. Anatomy Unit. Department of Surgery. Sao Paulo. BR
  • Ambrósio, Carlos Eduardo; USP. Faculty of Animal Sciences and Food Engineering. Pirassununga. BR
Acta cir. bras ; 26(4): 267-273, July-Aug. 2011. ilus
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-594345
ABSTRACT

PURPOSE:

To evaluate different protocols to isolate stem cells from ovine umbilical cord blood and adipose tissue.

METHODS:

There were used 5 samples of umbilical blood and 5 samples of perirenal adipose tissue from 10 female sheep. All the samples were obtained through surgery, to harvest aseptic samples. There were used 3 protocols for obtainment and culture of umbilical cord blood stem cells and 4 protocols for ovine adipose tissue stem cells.

RESULTS:

It was possible to observe only one successful protocol for the obtainment of umbilical cord blood stem cells. When analyzing the techniques used to obtain adipose tissue stem cells, only one of the methods was effective as well. Through colony forming unit assay, there were obtained 58 colonies of cells after seven days in culture. Flow citometry tests revealed the cells were positive to CD44 and exhibited negative reaction to CD38, CD45, CD41/61. These cells showed a growth curve with very well defined phases LOG, LAG and PLATEAU. This phases are typically seem in mesenchymal stem cells growth curves.

CONCLUSIONS:

The isolation and culture of mesenchymal stem cells from ovine umbilical cord blood are complex and request more detailed assays. Stem cells from fat tissue sheep showed mesenchymal characteristics, according to their cell growth curve, ability to origin colonies of fibroblastoid cells and positive reactivity with the antibody CD44 by flow citometry.
RESUMO

OBJETIVO:

Testar diferentes protocolos para o isolamento de células tronco a partir de sangue de cordão umbilical e tecido adiposo de ovinos.

MÉTODOS:

Foram utilizadas cinco amostras de sangue de cordão umbilical e cinco amostras de tecido adiposo perirrenal de 10 fêmeas de ovelha. A coleta das amostras foi realizada através de procedimento cirúrgico para coleta do material de forma mais asséptica possível. Foram realizados três protocolos de isolamento e cultivo das células-tronco do cordão umbilical e quatro protocolos para o isolamento e cultivo das células-tronco de gordura de ovinos

RESULTADOS:

Somente um dos protocolos utilizados para o isolamento das células-tronco de cordão umbilical foi efetivo. Dos quatro protocolos utilizados para isolamento das células-tronco de gordura, da mesma forma, apenas um obteve sucesso. Foi realizado o ensaio de unidades formadoras de colônias destas células, sendo contadas 58 colônias ao final de sete dias. Na citometria de fluxo essas células mostraram-se positivas para CD44 e negativas para CD38, CD45, CD41/61. Estas células apresentaram curva de crescimento com fases de LOG, LAG e PLATEAU bem definidas, características das curvas de crescimento das células-tronco de origem mesenquimal.

CONCLUSÕES:

O isolamento e cultivo das células-tronco mesenquimais do cordão umbilical de ovinos é de difícil realização, exigindo maiores ensaios e estudos profundos. Células tronco do tecido adiposo de ovelhas demonstraram características mesenquimais, de acordo com a curva de crescimento, habilidade de formação de colônias, células com morfologia fibroblastóide e reação positiva ao anticorpo CD44.
Assuntos


Texto completo: DisponíveL Índice: LILACS (Américas) Assunto principal: Separação Celular / Tecido Adiposo / Sangue Fetal / Células-Tronco Mesenquimais Tipo de estudo: Estudos de avaliação / Guia de Prática Clínica Limite: Animais Idioma: Inglês Revista: Acta cir. bras Assunto da revista: Cirurgia Geral / Procedimentos Cir£rgicos Operat¢rios Ano de publicação: 2011 Tipo de documento: Artigo País de afiliação: Brasil Instituição/País de afiliação: USP/BR

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