Evaluación de un método de extracción de glicoproteína de glándulas submaxilares de bovino / Evaluation of an extraction method glycoprotein bovine submaxillary glands

RESUMEN

Los métodos utilizados para la obtención de glicoproteínas de glándulas submaxilares de bovino consisten en esquemas que implican la eliminación de compuestos acuoinsolubles, aislamiento y purificación de las glicoproteínas. El propósito de este estudio fue evaluar un método de obtención de glicoproteínas (Escalona y col. 1989) a partir de glándulas de bovino para obtener un extracto mucínico destinado a la elaboración de un sustituto salival, con el fin de conocer el tipo y cantidad de proteínas presentes y su asociación con la viscosidad. Se analizaron 6 fases acuosas posteriores a la primera centrifugación. De cada una de las fases acuosas se tomó una alícuota y se determinó la cantidad de proteínas totales, y la viscosidad. La viscosidad aparente se midió con un viscosímetro Marca Brokfield modelo LVT con un eje Nº4 a una velocidad de desplazamiento a 73.42seg-1, y las proteínas se caracterizaron por electroforesis en geles de SDS-PAGE al 8 por ciento. Cada uno de los geles se escaneo y la densitometría se realizó en forma computarizada (un programa MultiAnalystTM /PC -Bio Rad- Versión 1.1). Se observó que a medida que se avanzaba en el esquema de extracción de glicoproteínas disminuía la cantidad de proteínas totales, el patrón electroforético mostró diferencias cualitativas entre las muestras evaluadas lo cual se reflejó en una disminución estadísticamente significativa (p<0,05) de la viscosidad aparente. Al expresar la viscosidad con relación al contenido proteico ésta aumentaba, lo que nos permitió inferir que a pesar que hubo una perdida de proteínas se preservaron las glicoproteínas viscosas a expensa del rendimiento proteico

ABSTRACT

For the obtainment of glycoproteins from bovine submaxillary glands methods are used that encompass the elimination of insoluble compounds, and fractionation and purification procedures. This study was designed to evaluate a particular method (Escalona et al. 1989) for the obtainment of glycoprotein to be used in the preparation of a salivary substitute, and aimed to gathering information on the type and amount of present proteins and their association with viscosity. For this purpose, the six aqueous phases following a centrifugation step in the fractionation scheme were analyzed for protein content (Lowry et al 1951), aparent viscosity (Brookfield viscometer, model LVT), and 8 percent SDS-PAGE electrophoresis with electronic processing of the densitograms (Bio-Rad/multi Analyst). The protein content, aparent viscosity (statistically significant P<0.05), and number of electrophoretic bands showed a decrease with the progress of the fractionation procedure. However, when aparent visxosity was ex pressed in terms of protein content it showed an increase, which is consonous with the relative enrichmentain of the fractions glycoprotein along the purification procedure