Antígeno excreción-secreción de Fasciola hepatica: ultrafiltración y aplicación en inmunodiagnóstico / Fasciola hepatica excretion-secretion antigen: ultrafiltration and application in immunodiagnosis

RESUMEN

La baja sensibilidad de la coprología en el diagnóstico de la fasciolosis humana ha motivado el desarrollo del inmunodiagnóstico. El antígeno de excreción-secreción de adultos de Fasciola hepatica (AFhES) en ELISA es adecuado para el screening, aunque sobrestima la prevalencia; cuando se utiliza en Western blot (WB) no muestra un buen reconocimiento de sus componentes. Para lograr una mejor preparación, se ultrafiltró el antígeno a través de membranas YM de 10, 30 y 50 kDa. Los retenidos (R) se usaron en ELISA y WB. La mayor discriminación entre positivos y negativos en ELISA y la mejor resolución en el reconocimiento al antígeno en WB, se logró con la fracción R50. Se destacan las moléculas de 9, 14, 65 kDa y la región alrededor de 27 kDa, detectadas con alta sensibilidad (90 al 100% de los sueros positivos) y especificidad (por ningún negativo). Al ensayar 29 sueros con otras parasitosis, sólo el de una persona con Paragonimus sp. reaccionó a la molécula de 65 kDa. ELISA-AFhES con todas las fracciones filtradas fue útil, facilitando el screening de la infección, aunque con R50 se obtuvieron los mejores resultados. La comprobación de los casos positivos se logra eficientemente utilizando la fracción R50 del AFhES en WB.

ABSTRACT

Low sensitivity in the coprologic diagnosis of human fasciolosis has motivated the development of immunodiagnosis. The excretion-secretion antigen from Fasciola hepatica adult worms (ESAFh) with ELISA is suitable for screening, although it overestimates its prevalence. However, when tested by Western blot (WB) it does not show any optimal recognition of its components. In order to obtain a better preparation, the antigen was ultrafiltered by YM 10, 30 and 50 kDa membranes. Retentates (R) were used by ELISA and WB. A higher discrimination between positives and negatives by ELISA and a better resolution in the antigen recognition in WB was achieved with the R50 fraction. Molecules of 9, 14, 65 kDa, and region about 27 kDa were detected with high sensitivity (90 to 100% of positive sera) and specificity (none of the negative sera). Among the 29 sera with other parasitic diseases, only one with Paragonimus sp. reacted to the 65 kDa molecule. ELISA-ESAFh with all filtrated fractions was useful, facilitating the infection screening even though the best results were obtained with R50. The verification of positive cases is efficiently achieved using the R50 of the ESAFh fraction by WB.