Effect of Low-Level Laser Therapy (660 nm) on Angiogenesis in Wound Healing: A Immunohistochemical Study in a Rodent Model

ABSTRACT

The aim of the present investigation was to evaluate the angiogenesis on dorsal cutaneous wounds in a rodent model treated with λ660 nm laser light. New vessel formation is a multistep process involving vessel sprouting, endothelial cell migration, proliferation and tube formation. Although several in vivo studies have shown that laser phototherapy influences tissue repair, a fully understanding of angiogenesis mechanisms are not yet known. Twenty-four young adult male Wistar rats weighing between 200 and 250 g were used. Under general anesthesia, one excisional wound was created on the dorsum of each animal and they were randomly distributed into two groups one control and one treated with laser (λ660 nm, 16 mW, 10 J/cm2). Each group was subdivided into three subgroups according to the animal death timing (2, 4 and 6 days). Laser irradiation started immediately after surgery and was repeated every other day during the experiment and marked with Sirius Red, specific for collagen, and immunomarked with anti-TGF-β and anti-von Willebrand factor. Marked sections underwent histological analysis by light microscopy and the mean area of the wound of each animal was calculated and analyzed by ANOVA and Tukey's test (α=0.05). Although at some death periods, collagen expression and number of blood vessels on irradiated animals were higher than in the control ones, no significant differences were found at any time in relation to TGF-β expression (p>0.05). It was concluded that laser treatment (λ660 nm) contributed to increase angiogenesis.

RESUMO

O objetivo do trabalho foi avaliar a angiogênese em feridas cutâneas no dorso de ratos tratados com o laser de λ660 nm. A neovascularização é um processo que envolve o aparecimento vascular, a migração das células endoteliais, a proliferação e a formação tubular. Embora diversos estudos in vivo demonstrem que a fototerapia laser influencia no reparo tecidual, uma compreensão completa dos mecanismos da angiogênese ainda não é conhecida. Foram utilizados 24 ratos Wistar novos, machos e adultos pesando entre 200 e 250 g. Uma ferida excisional foi criada no dorso de cada animal sob anestesia geral e os animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos G0 (controle) e G1 (laser λ660 nm, 16 mW, 10 J/cm2). Cada grupo foi subdividido em três subgrupos de acordo com o sincronismo da morte dos animais (2, 4 e 6 dias). A irradiação laser foi iniciada imediatamente após a cirurgia, sendo repetida diariamente durante a experiência, avaliada por meio de vermelho de Sirius, específico para o colágeno e avaliação imunológica com anti-TGF-β e o Fator anti-von Willebrand. As seções marcadas foram submetidas à análise histológica no foto-microscópio, onde a área média de cada subgrupo foi calculada e analisada usando o teste ANOVA e de Tukey (α=0,05). Os valores dos animais irradiados foram maiores em certos períodos da morte, na expressão do colágeno e no número de vasos em comparação com os grupos controles. Nenhuma diferença significativa foi encontrada na expressão do TGF-β entre os grupos nos períodos. Conclui-se que o tratamento com laser λ660 nm contribuiu para o aumento da angiogênese.