Determinación de la frecuencia de micronúcleos en eritrocitos de Bufo arenarum que habitan ambientes urbanizados / Determination of micronuclei frequency in erythrocytes of Bufo arenarum inhabiting urbanized environments

RESUMEN

Los anfibios son constituyentes integrales de ecosistemas naturales y agrícolas, y debido a su sensibilidad pueden ser utilizados como bioindicadores. La frecuencia de micronúcleos se emplea como un biomarcador que evalúa la respuesta a agentes genotóxicos. El objetivo del trabajo fue determinar y comparar la frecuencia de micronúcleos en eritrocitos de Bufo arenarum que habitan ambientes antrópicos de la ciudad de Río Cuarto. Se escogieron tres sitios modificados: un lago urbano Lago Villa Dálcar (33º06´S-64º22´W) y dos sitios de cultivo denominados Cultivo1 (33º05'S-64º26'W) y Cultivo 2 (33º05'S-64º25'W). Como control se escogió un área ubicada en las sierras de Comechingones, en el Campo Experimental Las Guindas (32º35'S- 64º42'W), pertenecientes a la UNRC. En cada sitio se recolectaron ocho individuos utilizando trampas de caída y relevamientos por encuentros visuales. A cada individuo se le extrajo sangre de la vena angularis inmediatamente después de la captura. Se realizaron dos extendidos por cada individuo, se dejaron secar al aire por 24 hs, luego se fijaron con metanol por 20 minutos y se colorearon con Giemsa al 5% durante 10 minutos. Posteriormente los frotis fueron analizados con microscopio (1000X) y se tomaron fotografías con cámara digital. La frecuencia de micronúcleos fue contabilizada para 4000 células por individuo. Se realizaron comparaciones utilizando el test de Kruskal-Wallis. Las frecuencias de micronúcleos encontradas son: Las Guindas: 0,17 ± 0,23; Cultivo1: 0,78 ± 0,28; Cultivo 2: 0,61 ± 0,45 y Villa Dálcar: 0,76 ± 0,47. Existen diferencias significativas entre el control y los demás sitios (p< 0,01). Los resultados obtenidos demuestran la relevancia en la aplicación del test de micronúcleos in vivo en anfibios anuros para comparar distintos ambientes. Estos resultados indicarían la necesidad de nuevas investigaciones y de un monitoreo más prolongado en el tiempo para estos ambientes, incluyendo por ejemplo otros tipos de biomarcadores, así como otras posibles especies representativas de la región.

ABSTRACT

Amphibians are integral constituents of natural and agricultural ecosystems, and because of their sensitivity can be used as bioindicators. Micronuclei test is used as a biomarker for determining the response to genotoxic agents. The purpose of this study was to determine and compare the frequency of micronuclei in peripheral blood erythrocytes of Bufo arenarum toads that inhabiting anthropic environments for the city of Rio Cuarto. Organisms used in the MN test were collected from three sites modified: an urban lakeVilla Dalcar (33º06´S-64º22´W) and two cultivation sites called Crop 1 (33º05'S-64º26'W) and Crop 2 (33º05'S-64º25'W). As a control site, an area in the mountains of Comechingones, Las Guindas (32º35'S-64º42'W), belonging to the UNRC was sampled. At each site, eight individuals were collected using pitfall traps and by visual encounter surveys. To each individual is bled from the vein angularis immediately after capture. We performed two extended for each individual, air-dried for 24 hours, then fixed with methanol for 20 minutes and stained with 5% Giemsa for 10 minutes. Then the smears were analyzed with microscope (1000X) and took pictures with digital camera. For each individual the frequency of micronuclei for 4000 cells was recorded. Comparisons were made using the Kruskal-Wallis test. Micronuclei frequencies found are: Las Guindas: 0.17± 0.23; Crop 1: 0.78 ± 0.28, Crop 2: 0.61 ± 0.45 and Villa Dalcar: 0.76 ± 0.47. There are significant differences between the control and the other sites (p< 0.01). These findings show the relevance in the application of micronucleus test in vivo for anuran amphibians to compare different environments. These results suggest the need for further research and monitoring longer time for these environments, including such other biomarkers, as well as other possible species representative of the region.