Alterações no reparo tecidual cutâneo em um modelo de resistência à insulina / Resistant mice cutaneous wound healing alterations in insulin

RESUMO

A obesidade associada às alterações metabólicas, tais como a resitência à insulina, provoca significativas modificações no decorrer do processo de cicatrização. O objetivo desse estudo foi inicialmente avaliar os efeitos da resistência à insulina induzida por uma dieta com elevado teor de gordura durante o reparo tecidual. E, em seguida, investigar o papel dos macrófagos neste processo. Observamos que os animais submetidos à dieta hiperlipídica (RHL) tornaram-se intolerantes à glicose e resistentes à insulina, além de aumentarem as taxas plasmáticas de colesterol e triglicerídeos em relação aos animais alimentados com ração padrão (RP). O grupo RHL apresentou uma menor taxa de contração da lesão e reepitelização em relação ao grupo RP. Observamos ainda maior quantidade de células inflamatórias (células NOS 2-positivas, macrófagos, e neutrófilos), menor densidade de fibras do sistema colágeno e maior densidade de miofibroblastos e vasos sanguíneos no grupo RHL. O dano oxidativo estava maior no grupo RHL bem como a expressão proteica do fator de crescimento transformante-β1 (TGF-β1) e α-actina de músculo liso (α-SMA). O grupo RHL apresentou altos níveis plasmáticos de TNF-α quando comparado com o grupo RP. Além disso, a proporção das células M1 (macrófagos ativados classicamente) e M2 (macrófagos ativados alternativamente) foi a mesma em ambos os grupos. Em relação a síntese e liberação de citocinas e fatores de crescimento avaliados através dos ensaios in vitro, observamos ainda que os níveis do fator de necrose tumoral-α (TNF-α) e interleucina-1β (IL-1β) estavam maiores no meio condicionado de macrófagos isolados dos animais do grupo RHL (MCRHL) em relacão ao meio condicionado de macrófagos isolados dos animais do grupo RP (MCRP). Além disso, os nossos resultados demonstraram claramente que os fatores solúveis produzidos por macrófagos isolados a partir de animais resistentes à insulina inibem a proliferação e a migração de fibroblastos. Através ...

ABSTRACT

Obesity associated with with metabolic alterations such as insulin resistance causes significant modifications during the healing process. Our aim was initially to analyse the effects of insulin resistance induced by a high- significant changes in skin combined fat diet during cutaneous wound healing. And then investigate the role of macrophages in this process. We observed that animals subjected to a high-fat diet (HFC) became glucose intolerant and insulin resistant and increased plasma cholesterol and triglycerides levels when compared to animals fed with a standard chow (SC). The HFC group had a lower rate of wound contraction and re-epithelialization than the SC group. Besides, HFC group presented a greater number of inflammatory cells (NOS 2- and F4/80-positive cells, and neutrophils), lower density of collagen fibers and higher density of myofibroblasts and blood vessels. Oxidative damage was greater in the HFC group as well as the protein expression of TGF-β1 and α-smooth muscle actin (α- SMA). The HFC group presented higher levels of plasma TNF-α when compared to RP group. Furthermore, the proportion of M1 cells (classically activated macrophages) and M2 (alternatively activated macrophages) was the same in both groups. Regarding to the synthesis and release of cytokines and growth factors evaluated by in vitro assays, we also observed that the levels of TNF-α and IL-1β were higher in conditioned medium of macrophages isolated from animals of HFC (MCHFC) group when compared to the conditioned medium of macrophages isolated from animals in of RP (MCSC) group. Furthermore, our results clearly demonstrate that soluble factors produced by macrophages isolated from insulin resistant animals inhibit the proliferation and migration of fibroblasts. Thus, we can show that insulin resistance delays wound healing process and suggest that the macrophages are involved in this delay