Caracterización molecular de aislados de Acanthamoeba spp / Molecular characterization of Acanthamoeba spp isolates

RESUMEN

Las especies del género Acanthamoeba tiene una amplia distribución, lo cual junto a sus estrecha relación con el humano aumenta la probabilidad de actuar como agente etiológico de enfermedades de gravedad variable según el estado inmunológico del individuo . La presencia de estos microorganismos en pacientes con queratitis, dermatitis y encefalitis, es subestimada como agente causal. Debido a la subjetividad limitada sensibilidad y especificidad en la identificación de estos microorganismos solo por morfología, es importante el empleo de herramientas moleculares. El objetivo de esta investigación se centró en la caracterización molecular de 14 aislados mantenidos en medio Pagé modificado en el Laboratorio de Amibiasis de la Escuela de Bioanálisis de la UCV, procedentes de muestras biológicas, mediante el empleo de PCR-RFLP (HinfI, HhaI, HaeIII), previamente identificados morfológicamente como el género Acanthamoeba, según los parámetros propuestos por Pussard y Pons, 1997. Todos los aislados se excluyeron del Grupo I por tener quistes de menos de 18 µm. De los 14 aislados seleccionados , 50% presentó características morfológicas compatibles con el Grupo II mientras que el otro 50% fue compatible con el grupo III. Desde el punto de vista molecular, 86% de los aislados clasificados como Grupo II amplificaron productos de PCR de 900 pb, y el 100% de los aislados del Grupo III de 700 pb, así como el 14% restante del Grupo II. Se Observó una tendenciaque sugiere, que a mayor tiempo (años) de mantenimiento en medios de cultivo, se espera un producto de PCR de 700 pb y variaciones fenotípicas en estos microorgnismos. Los aislados del Grupo III no se pudieron caracterizar molecularmente por PCR-RFLP, debido a que el patrón de digestión con las enzimas de restricción no coincidió con patrones publicados por Kong y Chung, 1996. Respecto al Grupo II, 71% (5/6) de los aislados se identificó a nivel de especie por medio del RFLP. Se identificó a A13 y A14 como A...

ABSTRACT

Members of the genus Acanthamoeba, have a wide distribution of pathogenic species, it`s close relationship with humans increases the probality of life threatening or critical health conditions depending on the immne status of the patient. Usually these protozoans are not considered as the main cause of keratitis, dermatitis, and encephalitis in patients. As a consequence of the low sensibility, specificity, and high subjectivity that involves the morphologic identification of this microorganisms, has been considered the importance of the use of molecular analyses for its identification. By PCR-RFLP analyses, where characterized 14 isolates of Acanthamoeba spp. maintained in Page (modified) culture media in El Laboratorio de Amibiasis de la Escuela de Bioanálisis de la UCV, from clinical samples. These isolates where previously identified as Acanthamoeba using morphological methods as established for Pussard and Pons, 1997. 100% of the isolates where excluded from morphological Group I for showing sizes under 18 µm. However 50% of the isolates where classified as members of morphological Group II and the other 50% as members of morphological Group III. Furthermore, 86% of the isolates classified as Group II exhited PCR products of 900 pb as expected, while 100% of the isolated classified as Group III and 14% of the remaining isolates from Group II showed PCR products of 700 pb. In addition, it`s been observed a tendency suggesting that the longer (time in years) the microorganism are maintained in culture conditions, it is expected to obtain a PCR product of 700 pb and major phenotypic alteracions. Moreover, species of isolates from Group III were not identified, because they showed patterns of digestion with restriction enzymes HinfI, HhaI y HaeIII that differed from the reference ones published in 1996 by Kong y Chung. On the other hand, 71% of the isolates belonging to Group II showed patterns of identificatiob compatibles with the reference Kong & Chung...