Cultivo de células-tronco derivadas de tecido adiposo: uma análise crítica / Culture of adipose-derived stem cells:a critical analysis

RESUMO

Introdução: células-tronco derivadas de tecido adiposo (ADSCs) são pluripotentes, tem coleta poucoinvasiva e apresentam alto rendimento celular em cultura, além do fato de o número de lipoaspirações, a principalfonte destas células, estar aumentando ao redor do mundo. A Cirurgia Plástica tem encontrado benefícios de seu usoem diversas áreas, o que ressalta a importância de se analisar criticamente os protocolos de cultivo atualmenteutilizados. Objetivo: descrever detalhadamente o protocolo de cultivo adotado pelo nosso laboratório para podermos realizar uma análise crítica sobre o cultivo de ADSCs. Método: excedentes de tecido adiposo foram doados ao laboratório com finalidade de pesquisa por cinco pacientes de ambos os sexos e faixa etária de 20 a 45 anos. De cada paciente, 30 mL do material gorduroso foram coletados em frasco estéril e transportados ao laboratório de cultura celular, onde foram submetidos, por 45 min, à digestão enzimática por 30 mg de colagenase tipo IA diluída em30mL de meio de Dulbecco Modificado por Eagle (DMEM) e posteriormente centrifugados para que se isolem ascélulas da matriz extracelular. A amplificação das culturas foi feita com solução de tripsina 0,05% + EDTA 0,02%. Para congelamento, utilizou-se meio de congelamento composto por 60% DMEM, 10% dimetilsulfóxido (DMSO) e 30% SBF. Resultados: o protocolo apresentado para o cultivo de ADSCs demonstrou um cultivo celularsatisfatório, completando três passagens de cultura em todas as amostras, com posterior congelamento edescongelamento. Conclusões: a literatura científica nos indica que a colagenase possibilita extração e isolamento de ADSCs, devendo-se atentar ao tipo utilizado. Quanto ao congelamento, dado a citotoxicidade do DMSO, novos protocolos com grandes amostras substituindo este crioprotetor por trealose devem ser testados, visto que este último produziu bons resultados e não apresentou efeitostóxicos nos estudos já publicados.

ABSTRACT

Introduction: adipose-derived stem cells (ADSCs) are pluripotent and present little invasive collectionand high cell yield in culture, besides the fact that the number of liposuctions, the main source of these cells, is increasing around the world. Plastic Surgery has found the benefits of the use of those cells in several areas, which increases the importance of critically analyzing the protocolscurrently used for cell cultivation. Objective: to describe in detail the cultivation protocol adopted by our laboratory in order to perform a critical analysis of the culture of ADSCs. Method: surpluses of adipose tissue were donated to the laboratory with research purposes for 5 patients of bothgenders and age between 20 and 45 years. From each patient, 30 mL of fatty material was collected in a sterile flask and transported to the laboratory for cell culture, where they were subjected during 45 min to enzymatic digestion by 30 mg of type IA collagenase diluted in 30mL of Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) and thencentrifuged to isolate the cells from the extracellular matrix. The amplification of the cultures was made with 0.05%trypsin solution + EDTA 0.02%. For cryopreservation was used freezing media consisting of 60% DMEM, 10%dimethylsulfoxide (DMSO) and 30% FBS. Results: The above protocol for growing ADSCs obtained a satisfactorycell culture, completing three cell passages in all samples, with subsequent freezing and thawing. Conclusions: The scientific literature indicates that collagenase get the bestresults in the extraction and isolation of ADSCs, paying attention to the type used. Regarding freezing, given thecytotoxicity of DMSO, new protocols with large samples replacing this cryoprotectant by trehalose should be tested, since the latter has produced good results and showed no toxic effects in published studies.