Determinação do perfil de expressão e metilação dos receptores tipo TRAIL, caspase 8 e Bcl-2 em câncer epitelial de ovário / Determination of expression profile of receivers and methylation TRAIL, capase 8 and Bcl-2 in ephithelial ovarian cancer

RESUMO

Dentre as patologias do trato genital feminino, o câncer epitelial de ovário (CEO) representa a sétima causa mais relevante de morbidade e mortalidade no mundo. Apesar dos avanços no tratamento dessa neoplasia, não houve melhorias equivalentes nas tax as de sobrevida das mulheres afetadas. O presente estudo visa analisar o perfil de expressão e metilação dos genes receptor es tipo TRAIL ( TRAIL-R2 e TRAIL-R3) , CASPASE- 8 e BCL -2 em pacientes com CEO a fim de prover uma melhor compreensão da biologia molecular deste tumor e da predição de respostas terapêuticas numa medicina person alizada. Para as análises, foram coletadas amostras de pacientes atendidas no Hospital Vera Cruz, em Belo Horizonte, Minas Gerais. Estas amostras foram destinadas à extração simultânea do R NA e DNA genômico pelo reagente TR Izol®. A expressão gênica de TRAIL-R2, TRAIL-R3, BCL-2 e CASPASE-8 foi avaliada por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) quantitativa em tempo real e o padrão de metilação dos promotores de TRAIL-R2, TRAIL-R3 e C ASPASE-8 foi analisado por PCR metilação específica. Observou-se que o grupo de pacientes com CEO metastático superexpressou todos os genes avaliados, enquanto que, pacientes com cistoadenoma seroso ovariano apenas não superex pressar am BCL-2. O grupo de pacientes com CEO primário expressou níveis reduzidos dos marcadores antiapoptóticos, TRAIL-R3 eBCL-2¸ que aliados a superex pressão de CASPASE -8, sugerem completamente não metiladas para o marcador TRAIL-R3 e que difer enças significativas foram encontradas entre a metilação presente nas ilhas CpG dos promotores de TRAILR3 eCASPASE-8 e os grupos histológicos. Entretanto, esse evento não se correlacionou com o silenciamento epigenético desses genes, o que sugere o envolvimento de outros mecanismos de controle transcricional...

ABSTRACT

The epithelial ov arian cancer (EOC) represents the seventh most important cause of morbidity and mortality worldwide among the female genital tract diseases. Despite the advances in the treatment of this malignancy, there were no equivalent improvements in the survival rates of affected women. The present study aims to analyze the expression and methylation profiles of TRAIL receptors ( TRAIL-R2 and TRAIL-R3 ), CASPASE-8 and BCL-2 genes in p atients with EOC in order to provide a better understanding of the molecular biology of this pathology and to predict therapeutic responses in a personalized medicine. Samples were collected from patients treated at Vera Cruz Hospital in Belo Horizonte, state of Minas Gerais. Those samples were used for simultaneous extraction of RNA and genomic DNA b y TRIzol ® reagent. The genetic expression of TRAIL-R2, TRAIL-R3, BCL-2 and CASPASE-8 were evaluated by realtime quantitative polymerase chain reaction and the meth ylation profile of TRAIL-R2, TRAIL-R3 and CASPASE-8 promoters were analyzed b y methylation specific PCR. Higher expression levels of all four markers were observed in metastatic EOC. In contrast, serous cystoad enoma overexpressed all markers, ex cept for BCL-2. The primary tumors underexpressed anti-apoptotic gen es, TRAIL-R3 and BCL-2 , and overexpressed proapoptotic genes C ASPASE -8 which suggest a genetic signature in TRAIL signaling pathway in EOC...