Interação vírus-vetor: caracterização da região 3’ não-codificante (NC) de vírus dengue tipo 3 (DENV-3), isolados de mosquitos e humanos, após a infecção experimental sucessiva e simultânea em mosquitos / Virus-vector interaction: characterization of the 3 'non-coding (NC) type 3 dengue virus (DENV-3), isolated from human and mosquitoes after successive and simultaneous experimentally infected mosquitoes

RESUMO

A dengue é considerada a mais importante das doenças virais transmitida por artrópodes que acomete o homem. O vírus dengue (DENV) é mantido na natureza através de replicação cíclica em hospedeiros vertebrados e mosquitos Aedes, sendo o Aedes aegypti o principal vetor. O seqüenciamento completo de DENV-3 isolado de Ae. aegypti naturalmente infectado do Rio de Janeiro em 2001 e de um caso humano em 2002, demonstrou uma similaridade de 99 porcento com DENV-3 isolado de um caso fatal humano ocorrido no mesmo período. A análise da região 3´NC do genoma viral demonstrou uma mutação nesta região, sugerindo uma deleção de 8 nucleotídeos (nts) na inserção de 11nts, característica de DENV-3 isolados no Brasil. Neste estudo, avaliamos se as diferentes variantes de DENV-3 na interação vírus-vetor através da determinação da competência vetorial em Ae. aegypti. As cepas de DENV-3 BR74886 #5 (cepa representativa do vírus com inserção de 11nts na região 3’NC) e BR73356 #5 (cepa representativa do vírus com a deleção de 8 nts), apresentando títulos de 8 x 107 PFU/mL e 7,3 x 107 PFU/mL, respectivamente, mantiveram suas características na região 3’NC do genoma viral após cinco passagens em cultura celular e foram selecionadas para a infecção experimental. A estratégia de infecção consistiu na utilização de 2.925 fêmeas de Ae. aegypti, sendo que 2.340 da geração F1 da população de Tubiacanga (RJ) e 585 da cepa controle PaeaA população experimental se mostrou competente para transmitir as duas cepas virais de DENV-3, no entanto a disseminação viral no corpo do mosquito apresentou-se de forma heterogênea, sugerindo haver vantagens para a cepa com inserção de 11 nts, uma vez que disseminou-se mais rapidamente. Quando as fêmeas de Ae. aegypti foram alimentadas com ambas as cepas, a disseminação no vetor comportou-se de maneira semelhante à observada quando alimentadas com a cepa representativa da inserção de 11 nts...

ABSTRACT

Dengue is considered the most important arthropod-borne viral disease that affects humans. Dengue virus (DENV) is maintained in nature by a cyclic replication in vertebrate hosts and Aedes mosquitoes, with the Aedes aegypti as the main vector. The complete sequencing of a DENV-3 strain isolated from Ae. aegypti naturally infected in Rio de Janeiro in 2001 and from a human case occurred in 2002 demonstrated a similarity of 99 percent with a DENV-3 isolated from a human fatal case occurred in the same period. However, the analysis of the 3Untranslated Region (UTR) of the viral genome showed a mutation in thisregion, suggesting a deletion of 8 nucleotides (nts) within the 11 nucleotides insertion, characteristic of DENV-3 isolated in Brazil. In this study, we evaluated whether the distinct DENV-3 variants presenting those characteristics showeddifferences on the virus-vector interaction by determining the vectorcompetence of two populations of Ae. aegypti. The DENV-3 strain BR74886#5(with the 11nts insert in the region 3'UTR) and the strain BR73356#5 (with an 8 nts deletion), presented titers of 8 x 107 PFU/mL and 7.3 x 107PFU/mL,respectively, maintained its characteristics in the 3'UTR region of the viral genome after five passages in cell culture and were selected for experimental infection. The infection strategy consisted in the use of 2,925 female Ae. aegypti 2,340 of a F1 generation from the Tubiacanga (RJ) population and 585 Paea control mosquitoes. The experimental population proved to be competentto transmit the two DENV-3 strains. However, the viral dissemination in thebody of the mosquito presented heterogeneously, suggesting that there are advantages for the strain with 11 nts insertion in the 3'UTR, once disseminated more rapidly...