Efeito secretório intestinal do sobrenadante de macrófagos estimulados com a toxina A do clostridium difficile: papel da interleucina-1B / Effect Intestinal secretory macrophages stimulated with supernatant Clostridium difficile toxin A: role of interleukin-1B

RESUMO

O Clostridium difficile produz duas exotoxinas denominadas toxina A (TxA; 308 kDa) e toxina B (TxB; 279 kDa). O modo de ação intestinal dessas toxinas ainda é pouco compreendido, não obstante vários trabalhos científicos confirmarem seu envolvimento na patogênese de doenças diarréicas inflamatórias. No início desse estudo foi determinado o efeito secretório intestinal induzido pelo sobrenadante de macrófagos estimulados com TxA ou TxB, no íleo de coelho montado em câmaras de Üssing. A partir desse protocolo, observou-se que o sobrenadante de macrófagos estimulados com TxA (3,2x10-7M, 9,6x10-7M e 3,6x10-6M) causa secreção intestinal (ΔIsc = 41,0, 52,0 e 99,0 μA.cm-², respectivamente). Entretanto, o sobrenadante de macrófagos tratados com TxB (3,6x10-7M) não alterou de forma significativa essa atividade (ΔIsc = 28,0 μA.cm-² vs ΔIsccontrole = 20,0 μA.cm-²). Vale salientar que a adoção de TxA (3,2x10-6M) diariamente nas câmaras de Üssing não produziu secreção intestinal (ΔIsc = 2,2 μA.cm-²). Ademais, a gênese do fator de secreção intestinal (FSI), presente neste sobrenadante, foi bloqueada (80%) pela incubação de TxA com o PCG4. Na etapa seguinte, investigou-se o envolvimento de proteína G na gênese do FSI, através do tratamento prévio dos macrófagos com a toxina pertussis ativa. Daí, evidenciou-se que esse procedimento é capaz de bloquear a liberação do FSI (bloqueio: 61%). A seguir, avaliou-se o efeito de vários bloqueadores farmacológicos sobre a síntese do FSI. Assim, foi observado que inibidores específicos, como por exemplo, inibidor de síntese protéica (67%), proteases (57%), fosfolipase A2 (54%), ciclooxigenase (62%), ciclo e lipoxigenase (48%), síntese de TNF-α (48%) e antagonista de PAF (55%), reduzem a síntese e liberação do FSI...