Novos ensaios e estudos cinéticos da endopeptidase neutra (EC 3.4.24.11): influência do par de anginina em P'2 P'3 na degradação fisiológica dos peptideos opioides que contem encefalinas / Further testing and kinetic studies of neutral endopeptidase (EC 3.4.24.11): peer influence anginina in P'2 P'3 in the physiological degradation of opioid peptides containing enkephalins

RESUMO

A endopeptidase neutra (NEP, encefalinase, neprilisina, EC 3.4.24.11) é uma zinco-metalloendopeptidase que hidrolisa ligações peptídicas, em resíduos hidrofóbicos na posição P'1. A NEP é amplamente distribuída em vários tecidos, e está envolvida na regulação e metabolismo de uma variedade de peptídeos biologicamente ativos tais como, substância P, encefalinas, peptídeo natriurético atrial, bradicinina, gastrina, neurotensina e o peptídeo quimiotático. Quatro peptídeos fluorogênicos com apagamento intramolecular de fluorescência contendo um grupamento ο-aminobenzoil (Abz) e N-(2,4-dinitrofenil)-etilenodiamina (EDDnp) nas extremidades amino e carboxi terminal respectivamente. Abz-dRRL-EDDnp, Abz-dRRV-EDDnp, Abz-dRRF-EDDnp e Abz-GGdFLRRV-EDDnp, foram seletivamente hidrolisados pela endopeptidase neutra (NEP) na ligação Arg-Leu, Arg-Val, Arg-Fen e Arg-Val, respectivamente. Os parâmetros cinéticos da hidrólise dos peptídeos Abz-dRRL-EDDnp, Abz-dRRV-EDDnp e Abz-dRRF-EDDnp da reação catalisada pela NEPr foi de Km = 2.8 μM, kcat = 5.3 min-1, kcat / Km = 2 min-1 μM-1, Km = 3.7 μM, kcat = 5.1 min-1, kcat / Km = 1.3 min-1 μM-1 e Km = 5.0 μM, kcat = 7.0 min-1, kcat / Km =1.4 min-1 μM-1, respectivamente. A elevada especificidade desses substratos foi demonstrada pela total resistência a ação de metaloproteases, serinoproteases e proteases presentes em preparações membranares de rim, pulmão, cérebro e outros tecidos do sistema reprodutor masculino e feminino humanos. O bloqueio amino e carboxi terminal protegeu esses peptídeos contra a ação de aminopeptidases, carboxipeptidases e ACE. Além disso o aminoácido, dR assegurou total proteção dos peptídeos Abz-dRRL-EDDnp, Abz-dRRF-EDDnp e Abz-dRRV-EDDnp contra a ação da termolisina e tripsina...