Validación de una metodología por HPLC para cuantificar quercetina total en extractos de Calendula officinalis / Validation of an HPLC method for quantification of total quercetin in Calendula officinalis extracts

RESUMEN

Introducción: los extractos de Calendula officinalis se utilizan como materia prima natural en diversidad de preparaciones farmacéuticas y cosméticas, sin embargo, no existen métodos oficiales para el control de calidad de dichos extractos. Objetivo: se validó una metodología analítica por HPLC para la cuantificación de quercetina total en extractos glicólicos e hidroalcohólicos de Calendula officinalis. Métodos: para cuantificar el contenido de quercetina total en las matrices, fue necesario hidrolizar los flavonoides glicósidos en condiciones óptimas. La separación cromatográfica se realizó en una columna SiliaChrom C-18 5 µm 4.6x150 mm, adaptada a una precolumna SiliaChrom C-18 5 µm 4.6x10 mm, con un sistema de detección UV a 370 nm. El sistema de elución fue en gradiente, donde la fase móvil se compuso de Metanol (MeOH) y ácido fosfórico (H3PO4) (0.08 por ciento p/v), la cuantificación se efectuó con el método de estándar externo y comparación con un estándar de quercetina de referencia. Resultados: la selectividad de la metodología frente los componentes del extracto y a los productos de degradación en condiciones de hidrólisis ácida - básica, oxidación y exposición a la luz, mostró que no hay señales que interfieran con la cuantificación de la quercetina. Se comprobó estadísticamente que el método es lineal entre 1,0 y 5,0 µg / mL. La precisión intermedia expresada como coeficiente de variación fue de 1,8 y 1,74 por ciento y el porciento de recuperación fue de 102.15 y 101.32 por ciento, para los extractos glicólico e hidroalcohólico, respectivamente. Conclusiones: la metodología propuesta cumple con los parámetros de calidad requeridos para la cuantificación de quercetina total, lo cual la convierte en una herramienta útil para el control de calidad de extractos glicólicos e hidroalcohólicos de C. officinalis(AU)

ABSTRACT

Introduction: calendula officinalis extracts are used as natural raw material in a wide range of pharmaceutical and cosmetic preparations; however, there are no official methods for quality control of these extracts. Objective: to validate an HPLC-based analytical method for quantification total quercetin in glycolic and hydroalcoholic extracts of Calendula officinalis. Methods: to quantify total quercetin content in the matrices, it was necessary to hydrolyze flavonoid glycosides under optimal conditions. The chromatographic separation was performed on a C-18 SiliaChrom 4.6x150 mm 5 µm column, adapted to a SiliaChrom 5 um C-18 4.6x10 mm precolumn, with UV detection at 370 nm. The gradient elution was performed with a mobile phase consisting of methanol (MeOH) and phosphoric acid (H3PO4) (0.08 percent w/v). The quantification was performed through the external standard method and comparison with quercetin reference standard. Results: the studied method selectivity against extract components and degradation products under acid/basic hydrolysis, oxidation and light exposure conditions showed no signals that interfere with the quercetin quantification. It was statistically proved that the method is linear from 1.0 to 5.0 mg/mL. Intermediate precision expressed as a variation coefficient was 1.8 and 1.74 percent and the recovery percentage was 102.15 and 101.32 percent, for glycolic and hydroalcoholic extracts, respectively. Conclusions: the suggested methodology meets the quality parameters required for quantifying total quercetin, which makes it a useful tool for quality control of C. officinalis extracts(AU)