Estudo de características dos agentes de criptococose: genótipos, polimorfismo, melanização e suscetibilidade a antifúngicos / Study of characteristics of cryptococcosis agents; genotypes, polymorphism, melanization and antifungal susceptibility

RESUMO

Os objetivos deste trabalho foram determinar frequência e características de polimorfismo celular em isolados clínicos de Cryptococcus spp. e utilizar novo método de inóculo individualizado para teste de suscetibilidade a antifúngicos (TSA) utilizando isolados de pacientes hospitalizados. O estudo de polimorfismo analisou 112 isolados de C. neoformans (Cn) e 65 de C. gattii (Cg), empregandomicroscopia ótica e microscopia eletrônica de transmissão (MET), análise de melanização, TSA a fluconazol (FCZ) e anfotericina B (AmB) por E-test® e curvas de morte (Time Kill Curves, TK) para AmB, tipagem molecular e mating-type (MAT). O estudo do novo método empregou a carga fúngica de 6 pacientes em suas amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) no momento do diagnóstico,7°dia e 14°dia de terapia antifúngica para CSNC. As cepas foram classificadas segundo tipo molecular e MAT, TSA com FCZ e AMB e teste de combinação por tabuleiro do xadrez. A frequência de polimorfismo celular foi baixa (4%;7/177), mas nunca antes relatada em isolados de micoteca. Foi inédito o encontro de polimorfismo em isolados de sangue, indicando a facilidade de disseminação decélulas atípicas pela corrente sanguínea, assim como em isolado de LCR. Todos os fenótipos polimórficos apresentavam células titãs (100%; 7/7) e, em menor porcentagem, pseudohifas (43%; 3/7). O fenômeno de polimorfismo parece ser exclusivo de Cn, desde que não foi observado em Cg. A espessura da parede das células titãs apresentou a mesma variação (350 nm a 900 nm) em relação àscélulas...

ABSTRACT

Our objectives were to describe the frequency and characteristics of polymorphismamong clinical isolates of Cryptococcus spp. and use new method of individualizedinoculum for the test of susceptibility to antifungal agents (TSA) against theetiological agent of cryptococcosis of the central nervous system (CSNC) inhospitalized patients. The study of polymorphism analyzed 112 isolates of C.neoformans (Cn) and 65 of C. gattii (Cg) using optical microscopy andtransmission electron microscopy (TEM), analysis of melanization, TSA forfluconazole (FCZ) by E-Test® and time kill curves method (TK) for amphotericin B(AmB), molecular typing and mating-type (MAT). The study of new methodemployed the fungal load of 6 patients in their cerebrospinal fluid (CSF) samples atdiagnosis, 7th and 14th day of therapy for CSNC. The strains were classifiedaccording to molecular type and MAT, TSA using FCZ or AmB and drugcombination using AMB and 5-flucytosine (5FC) by chequerboard, and TK. Thefrequency of cell polymorphism was low (4%; 7/177), but never before reported inisolates of collection. The occurrence of polymorphism in blood isolates wasunprecedented, indicating the ease of dissemination of atypical cells into thebloodstream, as well as in CSF. All polymorphic phenotypes showed titan cells(100%; 7/7), and, at a lower percentage, formed pseudohyphae (43%; 3/7). Thephenomenon of polymorphism seems to be unique in Cn, since it was notobserved in Cg. The wall thickness of the titans cells presented the same variation(350 nm to 900 nm) compared to regular cells. Low melanization was observed in71.4% (5/7) of polymorphic isolates, two isolates showed both patterns ofmelanization. All isolates with regular cells showed high level of melanization. Lowsusceptibility (MIC, >8 mg/L) was observed in almost half of the isolates with titancells, indicating that polymorphism may be related to resistance to FCZ. The newmethod of TSA with individualized...