Enzimoinmunoanalisis para rotavirus con nylon como fase solida / Enzyme-linked immunoassay for ratavirus using nylon as solid phase

RESUMEN

El presente trabajo describe un enzimoinmunoanálisis (EIA) para detectar Rotavirus en heces usando anticuerpos preparados en conejo inmovilizaods en nylon como fase de captura, y un segundo anticuerpo, preparado en cabra conjugado a enzima como fase de revelado. El conjugado se preparó usando peroxidas de rábano picante mediante la técnica de oxidación con periodato de Nakane. La fase sólida consistió en dados de nylon (66 CNL) de 3 mm de lado, los que fueron sometidos a hidrólisis parcial con ácido para liberar los grupos amino reactivos. El acople de anticuerpo de captura a la fase sólida se hizo mediante el uso de un brazo químico de glutarraldehido y resultó en una unión covalente entre la gamma globulina y el nylon. Como sustrato de revelado se usó o-fenilendiamina en buffer fosfato citrato pH 5,0 con 0,5% de peróxido de hidrógeno. El EIA se realizó con extractos acuosos de heces que fueron incubados con un dado de nylon sensibilizado con anticuerpos y posteriormente revelado incubado con el conjugado y posterior agregado del sustrato. Se leyerion como positivo todas aquellas muestras que desarrollaron color y cuya DO a 492 nm fue superior a 0,350. El método mostró perfecta correlación con muestras positivas y testigos negativos frente a un reactivo obtenido comercialmente