An evaluation of the pooling culture method for the detection of Escherichia coli enterotoxins

RESUMEN

Se estudió la eficiencia de la metodología de inoculación en "pool" de cepas que integran casos de diarrea aguda infantil, para la detección de escherichia coli enteroxigénico (ECET). Se procesaron 6989 cepas de E. coli correspondientes a 1485 casos de diarrea provenientes de 7 centros asistenciales del país. Las cepas de cada caso (3 a 5) se sembraron en "pool". Los cultivos se realizaron en medio de Evans con lincomicina (30 microng/ml) a 37-C durante 18 h con agitación y luego se trataron con sulfato de polimixina B (2200U/ml) por 30 min. Los cultivos se centrifugaron y los sobrenadantes se emplearon para la detección de la enterotoxina lábial al calor (LT) por GMI-ELISA con antisuero a toxina de cólera y la estable al calor (ST) por la prueba del ratón lactante. En aquellos casos que fueron positivos par LT, ST o LT-ST, por la metodología de "pool", se analizaron sus cepas individualmente, como así también en 1 de cada 15 caos negativod para detectar falsos negativos. Se hallaron 57 casos ECET-LT, 61 casos ECET-ST y 15 casos ECET-LT-ST. De los 89 casos negativos seleccionados al azar detectaron 2 casos (pl = 2.25%, intervalo de confianza del 95% entre 0,27% - 7,88) en los cuales una de las cepas no enterotoxigénicas inhibía a la ECET. En otros 5 casos (p2 = 5,62%, intervalo de confianza del 95% entre 1,85% - 12,63%), el falso resultado negativo se debió a la falla en la inoculación del "pool", pues el mismso resultó positivo al repetirse. A partir de los resultados obtenidos que el método de iniculación en "pool" es adecuado cuando se debe analizar un número elevado de casos de diarrea aguda y disponer de un diagnóstico en el menor tiempo posible, con la recomendación de realizar una siembra cuidadosa de las cepas que integran el caso tratando que el inóculo de cada una de ellas sea similar