Application of PCR-SSP method for HLA-B*27 identification as an auxiliary tool for diagnosis of ankylosing spondylitis / Aplicação da metodologia de PCR-SSP na identificação de HLA-B*27 como auxílio ao diagnóstico de espondilite anquilosante

ABSTRACT

ABSTRACT INTRODUCTION: Human leukocyte antigens (HLA) are molecules that present antigen to the immune system; their presence or absence have been described as an influential factor in some diseases. HLA-B*27 is an HLA polymorphism that has been associated with increased susceptibility to ankylosing spondylitis (AS) and other spondyloarthropaty. The detection of HLA-B*27 has been used as diagnostic and prognostic tool in these cases, as well as in the differential diagnosis of other diseases. OBJECTIVE: Standardize the single specific primer-polymerase chain reaction (PCR-SSP) methodology for use in the Immunogenetics Laboratory of the Universidade Estadual de Maringá (UEM), considering its specificity and cost-effectiveness. MATERIAL AND METHODS: A total of 30 individuals without AS positive for HLA-B*27 allele and 10 AS negative individuals, were previously tested by PCR-sequence specific oligonucleotide (PCR-SSO) and, in this study, by PCR-SSP. RESULTS: One hundred percent of the patients tested confirmed their results, even with different subtypes. CONCLUSION: Considering the high reproducibility and the broad spectrum of subtypes covering, it was concluded that the PCR-SSP identifying method for HLA-B*27 can be used as a routine diagnostic tool for spondyloarthropathies.

RESUMO

RESUMO INTRODUÇÃO: Os antígenos leucocitários humanos (HLA) são moléculas que apresentam antígenos ao sistema imune; a presença ou a ausência deles é descrita como fator influente em algumas doenças. O HLA-B*27 é um polimorfismo do HLA que tem sido associado à maior predisposição à espondilite anquilosante (EA) e a outras espondiloartropatias. A detecção do HLA-B*27 é utilizada como ferramenta diagnóstica e prognóstica nesses casos, assim como no diagnóstico diferencial de outras doenças. OBJETIVO: Padronizar a metodologia de reação em cadeia da polimerase-iniciador específico (PCR-SSP) para utilização no Laboratório de Imunogenética da Universidade Estadual de Maringá (UEM), considerando sua especificidade e seu custo-benefício. MATERIAL E MÉTODOS: Foram utilizados 30 indivíduos comprovadamente sem EA positivos para o alelo HLA-B*27 e 10 indivíduos negativos, testados previamente por PCR-oligonucleotídeo específico (PCR-SSO) e, neste estudo, por PCR-SSP. RESULTADOS: Cem por cento dos pacientes testados tiveram seus resultados confirmados, mesmo com diferentes subtipos. CONCLUSÃO: Tendo em vista a alta reprodutibilidade e o amplo espectro de subtipos que abrange, concluiu-se que a técnica de identificação de PCR-SSP para o HLA-B*27 pode ser utilizada como auxílio diagnóstico de rotina para espondiloartropatias.